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注意事项对会者来说不难,但是对新手来说应该还是挺多的,简单说几条:
1:避免交叉污染——勤换枪头和高压枪头和PCR管。
2:引物设计要正确,选择可靠的生物公司合成引物,如果公司不好,给的引物会不出结果。据说上海生工不错。
3:DNA提取要成功。
4:引物和模板和体系所加的比例要合适,模板过量会抑制体系的反应。
5:跑胶时注意区分开EB污染区和清洁区。
6:吸取试剂前不必每次都混匀,离心是为了把粘在壁上和盖上的试剂离下来。不离也没关系,可以直接用枪头吸。
但是配制的时候需要充分混匀,比如溶解引物,需要先混匀再分装。
还有DNA提取之后最好4度过夜之后再做PCR,这有利于DNA的充分溶解。