【求助】利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量

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标题:【求助】利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量

fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我刚刚接触实时定量pcr，想问一个很肤浅的关于用2－△△CT法分析基因相对表达量的问题。
举例：实验分组：对照组（n=6），实验组（n=6），要比较TGF mRNA表达情况。
是不是对照组的2-△△CT值都是1，而实验组的2-△△CT值都是1的倍数。
比如：对照组2-△△CT值分别是： 1 1 1 1 1 1
实验组2-△△CT值分别是：2.1 2.3 1.8 2.8 1.5 3.0
然后再用两个样本的t检验比较有无统计学差异？
还有一个问题就是：如果上述这样理解是对的，那么对照组2-△△CT值都是1，是不是不能反应对照组个体之间的差异？
谢谢大家的帮助！

babybabe[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你这个是怎么算的，还真看不出来，不过我做的时候是利用2-△△CT公式是用实验组与内参，对照组与内参之间的差值进行计算的

vivian4123[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 babybabe 于 2015-8-31 11:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你这个是怎么算的，还真看不出来，不过我做的时候是利用2-△△CT公式是用实验组与内参，对照组与内参之间的差值进行计算的

我最近在做类似的实验，2-△△CT到底是怎么算呢，我还是很明白，请指教一下！

dior[使用道具]
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发表于 2015-8-31 14:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

要懂相对定量，就需要先明白为什么要检测内参基因？为什么只检测靶基因不行？明白以后再看看标准曲线法的相对定量怎么算的，然后再由标准曲线法相对定量的问题看看2-△△CT如果解决的，接下来看看扩增效率修正法相对定量怎么回事怎么用。
最后几种相对定量方法各有优缺点。
介绍相对定量的多了去，但是大多数脑子里一团浆糊，所以再怎么说也是捣浆糊。高手有，忙。

toy[使用道具]
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发表于 2015-8-31 14:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对照组不可能全是1的，参照公式