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标题:【求助】293细胞，在做扫描电镜

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发表于 2015-8-31 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】293细胞，在做扫描电镜

我做的是293细胞，在做扫描电镜之前，已经用乙醇和叔丁醇脱水干燥处理，但是照出来的扫描电镜照片中，细胞显示干裂的现象，是因为脱水干燥处理不当吗？而且细胞照片发黑，请问哪位专业人士指点一下，万分感谢


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2015-8-31 11:36
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daomei[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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1、溶剂清洗不干净。
2、乙醇和叔丁醇脱水最好要梯度
3、脱水后最好做固定
4、脱水后最好冻干
5、冻干前最好预冻
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malong[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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不好意思，预冻后冻干是怎么处理。我原来没接触过细胞类的实验，知道的比较少。麻烦您了
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大花猫bb[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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先在冰箱的冷冻舱里冻上，固化后再在冷冻干燥机中冻干，
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xiaoxiaojinglin[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 xiaoxiaojinglin 为MSN好友 通过MSN和 xiaoxiaojinglin 交谈

 小中大

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乙醇和叔丁醇是按梯度的，脱水之前用戊二醛固定了，脱水之后是在室温下晾干的。您所说的冻干是怎么处理？
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xiaoxiaoai[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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环境扫描电镜或许可以，但一般的电镜室都有要求用那个繁琐的方法，除非你的样品脱水后不变型
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钻石[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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不行的，如果步骤太简单细胞会变形。其实整个过程下来也不是非常复杂，我们一般是从早上九点开始处理，两个样品一般到十二点多就差不多可以放冰箱冻了，下午再抽真空镀金，然后就可以看了，一天肯定能搞定的
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886爱[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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谢谢指点！那你们这种干燥方法就是冷冻干燥了？
再问一下，固定的时候一定要用锇酸固定吗？
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danzi[使用道具]
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发表于 2015-8-31 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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取适量已固定好血样于

1. 5 mL

离心管，低速离心

( 1500 r /min)

去上清，



0. 1

mol /L PBS

缓冲液漂洗

3

次，

每次

5 min;

体积分数

50%

、

70%

、

80%

、

90%

、

100%

酒精

( 2

次

)

脱水

;

加入适量无水乙醇混匀后，滴于洁净盖玻片上，室温自然干燥
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