小中大
采用改良Miller法抽提人白细胞DNA
１．试剂配制
• 1M Tris-HCl （pH8.0） 500ml
60.55g Tris 碱溶于400ml蒸馏水中，用浓HCl 调 pH8.0 (用浓HCl加量约21ml)， 定容到500ml, 高压灭菌。
• 0.5 M EDTA （pH8.0） 500ml
在400ml蒸馏水中加入93.05gEDTA-Na盐，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节pH至8.0 （约需10g NaOH颗粒），然后定容到 500ml，高压灭菌。
• 10% Triton-X 100 500ml
• 10% SDS 200ml
20gSDS溶于160ml蒸馏水中，加热至68℃助容，加水定容至200ml，备用。
• 蛋白酶K 10mg/ml 溶于水，分装于小离心管中，-20℃保存。
2、 DNA提取步骤
• 去柠檬酸钠或EDTANa2抗凝全血5ml（尽量不用肝素抗凝），置于50ml有盖离心管中。
• 加入5-8倍体积（约40ml，将离心管加满即可）冷蒸馏水，反复颠倒混匀，冰中放置5min，4×3750rpm，离心20min。
• 缓慢倾倒上清，再沉淀中加入预冷的0.1% Triton-X 100 （体积同上），轻柔混匀沉淀，如有离心，弃上清。
• 沉淀中加入2ml裂解液，彻底打碎沉淀，然后加入10%SDS 100 μl（至终浓度为0.5%），混匀。
• 加入10mh/ml蛋白酶K 40 μl（至终浓度为200 μg/ml），混匀，55℃， 3小时；或37℃，过夜消化（以过夜为佳）。
• 加入6.0M NaCl 0.7ml，剧烈振荡20秒。
• 3750 rpm 离心40min，将上清移至另一有盖离心管中。
• 加入2倍体积（约5.2 ml)无水乙醇或95%乙醇，反复颠倒混匀至出现絮状DNA沉淀，调处DNA之一Eppendorf 管中。
• 75%乙醇洗涤2遍。将DNA保存在75%乙醇中，放置于冰箱中（-20℃）备用。
