小中大
相关疾病:
先天性卵巢发育不全综合征
实验目的:检测目的基因单核苷酸多态性S/X
体系配制:10×PCR Buffer 2.50
10mM dNTPs 0.40
Taq DNA聚合酶(2U/ ) 0.40
正向引物(25uM) 0.4
反向引物(25u M) 0.4
ddH2O 19.60
模板(100ng/ ) 2.00
总体积 25.00
PCR条件
94 C 变性 5min;
94 C 60s,60 C 30s,72 C 45s 共35个循环;
72 C 延伸 2min;
预期PCR产物为488bp
酶切反应
经MnlI限制性内切酶消化后,SS基因型在胶图中有两个片断(285bp和203bp),SX基因型有三个片断(285bp、248bp和203bp),XX基因型有两个片断(248bp和203bp)
电泳条件
3%琼脂糖凝胶,110V,1小时20分钟,大的水平电泳槽,正负电极间距离有24cm