PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】怎样做到PCR的热启动！

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标题:【求助】怎样做到PCR的热启动！

langlang[使用道具]
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发表于 2015-9-4 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
打开PCR仪，预热到80度.

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怎么操作？我是菜鸟，不明白该怎么样预热！
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-9-4 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

俺8个片段的RT－PCR都是用热启动做的，懒得一一去摸条件。
PCR反应体系配制好，不加酶，分装到各已加cDNA模板的PCR管中。
酶用Buffer、水稀释到0.5U/μL备用。
将PCR管置PCR仪上，设85度5min，在运行到第3分钟时，开盖，为每管加入稀释好的酶溶液，20μL体系加2μL酶溶液，终浓度为1U/体系。然后95度3min------开始PCR正常循环。
2分钟搞定开盖和加酶，对小于十个样本还行，多了就手忙脚乱。
看着PCR管冒气蒸发（用热盖，不加油），心里着急是肯定的。
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发表于 2015-9-4 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在传统的PCR反应中，极易发生引物错配和二聚体的形成，继而导致非特异性产物的扩增。热启动方法的问世有效地解决了这些问题，不仅优化了目标扩增产物，同时也减少了非特异性扩增，而且使得在传统PCR技术中较难扩增的单拷贝基因以及超长片段变得更简便。
金思德 E1000-PCR仪是目前市场上唯一具有热启动功能的PCR仪，它主要是通过物理方法实现的热启动，能够在不使用昂贵的热启动酶的条件下，就可以有效地减少反应中非特异性产物的产生。
经实验室的研究结果表明，通过使用E1000-PCR仪的热启动功能，能够有效地帮助实验人员在做较难扩增的目标产物时得到最佳的实验结果，减少实验摸索时间，快速解决问题。
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vcve[使用道具]
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发表于 2015-9-4 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一定要热启动吗？
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