PCR仪

我建议，配总管的时候，是加水，mix和cDNA模板。混匀，每孔加好，最后再加引物的，因为20ul体系中经常只需要1ul的模板，如果是最后每个孔每个孔的加，枪头外带一点点，误差就会大。至于要不要加到管底是无所谓的，一离心就会到管底的。还有气泡的问题，我们知道，PCR开始的时候，温度是升高到95度的，这样的高温，气泡都会破的。

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引物加的更少吧，也就0.4ul，比模板要少，按您的说法“最后每个孔每个孔的加，枪头外带一点点，误差就会大”，就算最后加引物是不是也同样存在误差大的问题呢？如果担心枪头外带一点点误差大的话，可以换枪头吧，不过有点浪费。