【求助】qPCR如何确保复孔一致性 - 经验共享

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标题:【求助】qPCR如何确保复孔一致性

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发表于 2015-9-4 18:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

考虑下是否仪器的问题，之前遇到过，换新仪器就解决了

am10[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

操作的确的确很关键。还有一个技巧是，提高cDNA的体积。我们做384孔 qPCR总体系10ul，除了mastermix和引物、探针之外（大概7ul），其余全部都加上稀释好的模板。如果你只加1ul的模板，肯定不准确，复孔差异都很大。

ero11[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 am10 于 2015-9-4 18:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

操作的确的确很关键。还有一个技巧是，提高cDNA的体积。我们做384孔 qPCR总体系10ul，除了mastermix和引物、探针之外（大概7ul），其余全部都加上稀释好的模板。如果你只加1ul的模板，肯定不准确，复孔差异都很大。 ...

384well？不会眼花？

ffaa[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

We use EPMOTION 5075 for automatically pipetting .

附件

2015-9-4 18:11

20702233.jpg (21.7 KB)

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ffaa 于 2015-9-4 18:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
We use EPMOTION 5075 for automatically pipetting .

这个绝对是高科技了，我们同样是用384well plate，同样是10ul的体系，可惜只能每次用手加了。
刚开始做的时候数据确实丑的想撞墙，不过多做几轮后就好多了，我每次3个复孔之间的SD能够控制在0.00x-0.0x之间。

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发表于 2015-9-4 18:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 summerxx 于 2015-9-4 18:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个绝对是高科技了，我们同样是用384well plate，同样是10ul的体系，可惜只能每次用手加了。
刚开始做的时候数据确实丑的想撞墙，不过多做几轮后就好多了，我每次3个复孔之间的SD能够控制在0.00x-0.0x之间。 ...

怎么叫“丑的想撞墙“？
建议向楼主谈谈你是怎样有效控制复孔的SD的。

cbou876[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ffaa 于 2015-9-4 18:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
We use EPMOTION 5075 for automatically pipetting .

只能说你们太有钱了。我们96well的都是一个一个加，跟老板说买把排枪，老板说我们不常用，其实天天在做realtime，晕死了。数据有跳动就给脸色看。。。

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发表于 2015-9-4 18:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

排枪没用的，pcr体系都很小，排枪取液时液面不够深，也很难做到均一。

shkudo[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

溶解曲线是这种怎么解释？扩增曲线是S型

ha111[使用道具]
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发表于 2015-9-4 18:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个绝对是高科技了，我们同样是用384well plate，同样是10ul的体系，可惜只能每次用手加了。
刚开始做的时候数据确实丑的想撞墙，不过多做几轮后就好多了，我每次3个复孔之间的SD能够控制在0.00x-0.0x之间。

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这个SD控制不要太好啊！请教怎么做到的，期待大神回复

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