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标题:【求助】蛋白纯化求助

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发表于 2015-9-7 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白纯化求助


用E.coli表达了一种蛋白药物，现在将细胞裂解后想进行过滤纯化，但是发现有DNA残留，不知道是不是DNA堵塞了膜孔，过滤不出来，大家有没有什么好得方法去除DNA啊，如果用DNA酶的话，用量应该怎么计算呢？
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发表于 2015-9-7 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大肠裂解液直接用除菌过滤是不合适的。不知规模是多大？小规模建议高速离心，大规模建议切向流微滤，没必要用到DNA酶增加杂质。
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 小中大

量还是比较大的，所以离心过滤仪器成本太高了，现在在用切向流微滤，但是感觉DNA线性堵塞膜孔，蛋白过不去。。想是不是需要用DNA酶把DNA切小一点？
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发表于 2015-9-7 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声将DNA打碎
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 小中大

你多大量？我当时发过一批500L的大肠，都是用的那种筒式离心机，很好用的，完事下来就可以直接上柱子了。
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发表于 2015-9-7 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

堵膜孔的原因很多，你确定是DNA？
其实在微观上，膜带有电荷，很多带电荷的东西都可能fouling膜。蛋白质aggregate本身说不定也能堵膜，要避免变性。
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发表于 2015-9-7 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征

先用0.45um的滤膜过滤后再上柱子
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2015-9-7 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们做的最大的是300L的一般都是离心后过柱子的
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发表于 2015-9-7 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

破碎的时候可以考虑加一些DNA酶，国外不少工艺也是这么做的，尤其是胞内表达的蛋白，DNA释放很多。
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IAM007[使用道具]
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 小中大
我们使用PEI沉淀核酸，再用硫酸安把蛋白沉淀去除PEI。
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