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标题:【求助】单抗表达中轻链的问题

911[使用道具]
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发表于 2015-9-8 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】单抗表达中轻链的问题


根据我们过往的经验和近期实验，发现CHO表达某些单抗时上清中存在过多的游离轻链，轻链二聚体等，尤其在表达量差的细胞株中更明显，猜测这也是导致单抗表达量低的一个原因，不知大家怎么看待这个问题
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发表于 2015-9-8 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问是如何检测的？纯化后检测还是直接测上清液？
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finger[使用道具]
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发表于 2015-9-8 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

轻链更容易表达，表达量差的细胞株重链表达量跟不上，无法形成完整抗体，所以游离轻链多？
问下你们是否是H/L分开转的？
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发表于 2015-9-8 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问是如何检测的？纯化后检测还是直接测上清液？

==============================

直接检测上清液，跑SDS-PAGE
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发表于 2015-9-8 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
轻链更容易表达，表达量差的细胞株重链表达量跟不上，无法形成完整抗体，所以游离轻链多？

================================

问下你们是否是H/L分开转的？
这或许是个原因。轻重链是分开转的
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dog002[使用道具]
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发表于 2015-9-8 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

抗体分子重轻链在细胞内合成后，重链的VH、CH2、CH3区域都可以自身形成高级结构，而CH1区域要跟轻链结合后才能形成高级结构；因此，体外表达抗体在细胞株构建之初往往都已经考虑了轻链的过量表达，有利于完整抗体的组装。
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发表于 2015-9-8 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

H：L 2：1 我以前都是这样转的。
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-9-8 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xevin 于 2015-9-8 11:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

H：L 2：1 我以前都是这样转的。

能不能分享下，两个载体使用不同的抗性吗？H:L 2：1是载体量的比例吗？
现在像GS系统一类的不是都是双表达框的吗，或者invitrogen公司的DHFR系统也有双表达框载体。不是特别清楚目前的主流还是构建两个载体进行共转的吗
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-9-8 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dog002 于 2015-9-8 11:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

抗体分子重轻链在细胞内合成后，重链的VH、CH2、CH3区域都可以自身形成高级结构，而CH1区域要跟轻链结合后才能形成高级结构；因此，体外表达抗体在细胞株构建之初往往都已经考虑了轻链的过量表达，有利于完整抗体的组装。 ...

能传个支持文献吗，感觉说的很有道理。
我觉得两个问题要搞清楚，1个是轻链和重链比较而言，轻链很容易表达，就是转的少也很容易表达量大；2是表达程度是一致的，有必要让轻链过表达，为了形成完整的抗体。
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