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标题:【求助】细胞株稳定性测试-加压与否

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你描述的是自己的项目经验吗?

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现在做的项目主要是GS和DHFR两个系统,我们做过GS的加压和不加压两个月的稳定性,加压是很稳定的,不加压有下降但可以达到70%以上的稳定性(当然也有不稳定的情况)。
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说的是GS系统,基因更容易丢失,容易出现表达量下降情况,后来的GS敲除细胞中专门也强调这样更利于基因稳定。说DHFR系统的表达比较稳定,基因丢失不严重。

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我们很少单独用DHFR赛选系统,一般单独用的是GS系统。半年前我做过一项目是两个基因分别用这两套系统共转,后来发现DHFR筛选系统很不稳定,不同的筛选压力表达明显差异。一般来说DHFR筛选系统优点是筛选到的表达量要比GS系统高很多,缺点就是不稳定。
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还有关注个一篇关于细胞传代稳定性的文章提到,表达量下降是由于基因插入位点调控序列的甲基化导致的,基因拷贝数没发生变化。

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我们之前做过基因拷贝数的分析,两个月的稳定性拷贝数有成倍增加但在一个数量级以内,不知道算不算增加的。
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拷贝数不应该增加吧,或者检测方法有问题
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莲花白[使用道具]
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在做稳定性试验时,我们的做法是加压和不加压都做,然后进行比较。不管采用哪种方法,到最终的生产阶段是不能加压的,最多只能在扩培过程中加压。
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QUOTE:
原帖由 莲花白 于 2015-9-8 14:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

在做稳定性试验时,我们的做法是加压和不加压都做,然后进行比较。不管采用哪种方法,到最终的生产阶段是不能加压的,最多只能在扩培过程中加压。 ...

你们做的细胞表达项目是采用什么传代计算的,倍增还是传代方式?能否说一下你们的计算细节。
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莲花白[使用道具]
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传代计算在《生物制品生产鉴定用动物细胞基质制备及鉴定规程》中有定义啊,
(四)生产用细胞培养
生产用原材料的选择和细胞操作环境应符合本规程‘细胞库的建立’中有关规定。
从冻存的WCB中取出一支或多支安瓿,混合后培养,传至一定代次后供生产用。其代次不得超过该细胞用于生产的最高限定代次。生产用细胞的最高限定代次应根据研究结果确定,但不得超过国际认可的最高限定代次。从WCB取出的细胞种子增殖的细胞不得再回冻保存后而再用于生产。
体外培养细胞龄的计算
二倍体细胞龄以细胞群体倍增(Population Doubling)计算,以每个培养容器细胞群体细胞数为基础,每增加一倍作为一世代,即一瓶细胞传二瓶(1:2分种率),再长满瓶为一世代;一瓶传四瓶(1:4)为二世代;一瓶传八瓶(1:8)则为三世代。生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3内。
传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代,每传一次为一代。
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