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标题:【求助】关于连续传代中的基因序列、拷贝数...

耗子===[使用道具]
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发表于 2015-9-8 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于连续传代中的基因序列、拷贝数...


请教：
我们的细胞在做连续传代过程中发现了一个问题.请教有没有出现类似的问题？为何会出现这种情况啊？
连续传代40代的细胞与WCB基因序列是一致的，但基因拷贝数较WCB增加了，表达量较WCB降低了，而且40代细胞批培养过程中生长曲线也发生了变化。
谢谢
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veiwu[使用道具]
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发表于 2015-9-8 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你们的细胞是什么细胞？是DHFR缺陷型细胞吗？你们检测出来拷贝数增加，应该是误差范围内的，你们的拷贝数测了几次？
传代40代后基因拷贝数往往下降，或者不变，但是产量仍下降。多个目的基因串联，很容易导致拷贝数下降。或者基因整合位点的位置效应，导致拷贝数不变但是产量下降，还有可能是由于目的基因操纵子的甲基化，使得拷贝数不变产量下降。
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发表于 2015-9-8 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的，基因拷贝数增加应该是检测误差，理论上基因整合到染色体后，压力不增加的前提下，拷贝数应该是不变或者减少的，基因拷贝数的检测方法误差还是很大的。
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发表于 2015-9-8 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们是CHO细胞，GS系统的
可是40代的拷贝数是WCB的3~4倍之多，基因拷贝数的检测方法（SYBR GreenI法）误差有这么大吗？
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发表于 2015-9-8 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

连续检测3次的结果。是送到外单位检测的。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-9-8 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 耗子=== 于 2015-9-8 15:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们是CHO细胞，GS系统的
可是40代的拷贝数是WCB的3~4倍之多，基因拷贝数的检测方法（SYBR GreenI法）误差有这么大吗？

理论上，SYBR 荧光定量PCR误差没那么大，差三倍，是1跟3的区别，还是多少呢？能否给出具体的数据，呵呵，这个不涉及到泄密吧？排除检测误差，我怀疑是否是检测细胞状态不一致，你们的40代细胞，是定义倍增40代吗？还是换液40代？
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发表于 2015-9-8 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既然你们用GS系统，传代过程中没加MSX吧？
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发表于 2015-9-8 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我大概算了一下，传代后与未传代相比，拷贝数增加了3倍左右，与楼主的一样。这肯定是有特定原因的。是否有消除荧光PCR中引物二聚体的影响呢？
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-9-8 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vvmmoy 于 2015-9-8 15:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我大概算了一下，传代后与未传代相比，拷贝数增加了3倍左右，与楼主的一样。这肯定是有特定原因的。是否有消除荧光PCR中引物二聚体的影响呢？

这个就不是很清楚了。具体的拷贝数实验是同事做额的 ，因为这一方面不懂的
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发表于 2015-9-8 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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46XX性发育睾丸疾病
样本        H (copies/?l)        L(copies/?l)
MCB        2.37E+07        2.11E+07
WCB        1.62E+07        1.34E+07
40代        8.61E+07        6.46E+07
传代过程有家MSX的。40代是指每2~3天传代1次哦
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