【求助】POROS A 20测定抗体表达量遇到的问题

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标题:【求助】POROS A 20测定抗体表达量遇到的问题

jkobn[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人在实验中遇到一个问题，在用POROS A 20测定抗体表达量的时候，平衡缓冲液用PBS，洗脱缓冲液用ph2.5的柠檬酸缓冲液，有没有虫友做过类似的实验，1）在制作标准曲线时，由于两者缓冲液不一致，导致基线不一致，这样的峰面积积分出来是否准确呢，2）在柱子用了一段时间后，每次走样品的峰面积不是很固定，相差挺大的，是什么原因呢，有没有什么解决办法，谢谢，3）测定抗体表达量的标准品一般用什么做标准品，能用市售品做标准品吗？市售品需要标定吗，谢谢各位大虾

abc816[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

基线不稳，不能怪柱子。我就曾遇到过，因为水和缓冲盐，造成的基线不稳。建议上针空针，看看基线有多不稳定，基线什么的跑不稳，就先别谈定量什么的，肯定不准。

baidukk[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1）如果是缓冲液的差异，考虑置换标准品的缓冲液？
3）如果是仿制药，用原研做标品。如果新抗体用Fc区一致抗体作为标品的就行吧

panda王[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果法定标准品不可获得，可以暂时用商业化标准品。
但是，最后或者购买法定，或者自制并鉴别、标定工作标准品。

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢，，各位大虾看看我这个标准品跑出来的图，这个基线应该是由A与B缓冲液不一样，导致的吧，2-6min的时候用缓冲液洗脱的大家有没有遇到这样的问题？

附件

2015-9-8 17:15

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JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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2015-9-8 17:15

60882160.jpg (29.56 KB)

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发表于 2015-9-8 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 abc816 于 2015-9-8 17:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

基线不稳，不能怪柱子。我就曾遇到过，因为水和缓冲盐，造成的基线不稳。建议上针空针，看看基线有多不稳定，基线什么的跑不稳，就先别谈定量什么的，肯定不准。 ...

基线是稳的，但是洗脱之前与洗脱之后两者基线不一致，怎么办？有影响吗？

附件

2015-9-8 17:16

99606741.jpg (29.56 KB)

tudou85[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

标准品和样品均是同一效果，图谱接近，那应该就没问题吧。因为你是通过标准品的标曲回算出样品浓度，只要谱图米有差异，那么面积的由来还是准确，有外推意义的。你得叠图看看样品与标准品的基线处是否重合

ero11[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

POROS A的说明书，想必lz没有仔细看清楚。。。
baseline shift要解决必须换缓冲液，柱子要清洗，说明书上有方法，点到即止。

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-9-8 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ero11 于 2015-9-8 17:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

POROS A的说明书，想必lz没有仔细看清楚。。。
baseline shift要解决必须换缓冲液，柱子要清洗，说明书上有方法，点到即止。

您好，是两者的盐浓度要一致吗，可不可以多点一点，我还是很困惑

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