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标题:【求助】大肠杆菌表达重组蛋白

荷塘青蛙！[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大肠杆菌表达重组蛋白


大肠杆菌表达胸腺素六串体，工程菌已构建好，复苏扩增的时候，SDS-PAGE可确认目的蛋白的表达，但是一进行大规模的培养（上发酵罐）----80L，就发现蛋白表达几乎是为零，请问各位大师问题会出在哪里？
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iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
给你推荐个“笨”方法：复苏扩增时显示有表达，说明菌株没问题，但是放大后不表达（终点？），可以通过扩大过程中分步收集留样检测，来判断哪个过程出现了丢失。一般的可能性是工程菌株不稳定。
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feiya[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
发酵过程补料对表达影响很大，如果有诱导剂，诱导剂的加入时间也决定表达量的多少？
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shkudo[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上，一般先用摇瓶和小罐进行发酵条件优化，最后放大到大规模发酵。
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nn255[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你构建出来，跑了SDS看有产品就没有进行小试的研究吗？
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shkudo[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

朋友，小试没有经过中试放大慢慢摸索就想一步到位么？
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面都很专业啊，确实要进行各种优化的
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iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
需要进行摇瓶和10L发酵罐的小试，直接上80L？
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