【求助】关于CHO细胞的乳酸代谢

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标题:【求助】关于CHO细胞的乳酸代谢

gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教前辈
同样的培养工艺为什么后期几批乳酸水平明显升高（大于5g/L）产量下降是培养基干粉放久后导致的么？机理是什么？

S6044[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

乳酸浓度持续升高与产物表达量下降的关联在CHO细胞中几乎成为一种共识，它牵涉到方面还是较多，鉴于楼主是重复工艺，排查起来应该相当简单。
楼主工艺是否是反应器工艺，如果是，请将几次实验的控制pH比较一下。
再一个，请将几次实验的细胞代次比较一下，也许有一些有用的信息

am10[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看看是不是跟谷氨酰胺降解有关！

gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-9-9 11:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 S6044 于 2015-9-9 11:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

乳酸浓度持续升高与产物表达量下降的关联在CHO细胞中几乎成为一种共识，它牵涉到方面还是较多，鉴于楼主是重复工艺，排查起来应该相当简单。
楼主工艺是否是反应器工艺，如果是，请将几次实验的控制pH比较一下。
再一个，请将几 ...

谢谢你的回复是发酵罐代次完全一致 pH控制也完全一致只是后期由于乳酸的原因pH波动幅度在0.2个单位以上谷值在6.65与6.75之间而正常批后期pH能控制在6.95以上波动很小不知道什么原因

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发表于 2015-9-9 12:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gmjghh 于 2015-9-9 11:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢你的回复是发酵罐代次完全一致 pH控制也完全一致只是后期由于乳酸的原因pH波动幅度在0.2个单位以上谷值在6.65与6.75之间而正常批后期pH能控制在6.95以上波动很小不知道什么原因 ...

检视一下异常批pH电极校准记录以及前24小时pH值，可以试一下将初始pH值控制点调下0.1-0.2个单位

any333[使用道具]
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发表于 2015-9-9 12:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想问一下，乳酸异常的这批次，除了表达量不高，细胞密度和活率方面也出现偏差了吗？每天的耗糖呢

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发表于 2015-9-9 12:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你的回复是发酵罐代次完全一致 pH控制也完全一致只是后期由于乳酸的原因pH波动幅度在0.2个单位以上谷值在6.65与6.75之间而正常批后期pH能控制在6.95以上波动很小不知道什么原因
检视一下异常批pH电极校准记录以及前24小时pH值，可以试一下将初始pH值控制点调下0.1-0.2个单位
......

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前期pH无明显区别下调是在72h后是否干粉的某些成分发生改变导致的？

gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-9-9 12:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想问一下，乳酸异常的这批次，除了表达量不高，细胞密度和活率方面也出现偏差了吗？每天的耗糖呢

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最高密度稍有下降活率后期day9开始有下降耗糖很厉害 2g/D以上

yhn[使用道具]
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发表于 2015-9-9 12:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大量耗糖产生乳酸的原因，我猜测可能有两个：1是细胞TCA循环或者呼吸链受抑制，需要提高无氧呼吸来获得足够ATP，但我觉得这种可能性不大...2是你说的培养基中某种氨基酸成分缺失，导致大量的丙酮酸被拿去合成关键氨基酸，而没有走进TCA循环，如果是这样的话，你就查一下Ser和Ala，因为这两个氨基酸和丙酮酸可以互相转换的
纯属个人愚见，诸位轻拍砖

gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-9-9 12:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 yhn 于 2015-9-9 12:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

大量耗糖产生乳酸的原因，我猜测可能有两个：1是细胞TCA循环或者呼吸链受抑制，需要提高无氧呼吸来获得足够ATP，但我觉得这种可能性不大...2是你说的培养基中某种氨基酸成分缺失，导致大量的丙酮酸被拿去合成关键氨基酸，而没有 ...

能相互转换的AA不止这两个吧？