小中大【求助】梯度洗脱出现鬼峰
大家好，我在用甲醇－水做梯度洗脱时，一直有一个平头的鬼峰出现，现在排查了很多原因，都找不出问题所在，请教大家是否遇到过此类问题，麻烦给予指教。
我用的梯度是：
甲醇－水
0min 73 27
30min 73 27
40min 90 10
60min 90 10
流速：0.8ml/min 柱温：30度
在50min左右一直有一个峰高2～3mAu，面积100多的平头鬼峰
1.怀疑是试剂问题，将之前用的国产甲醇和实验室自制去离子水————换为：进口J.T.BAKER甲醇，娃哈哈纯净水，屈臣氏蒸馏水，鬼峰仍出现；
2.换一根柱子，鬼峰仍出现；
3.换机器（将Agilent换成waters），仍有鬼峰，只不过形状变成尖峰；
4.甲醇－水（90：10）等度洗脱，无鬼峰出现；
4.将柱子换为两通，梯度洗脱，无鬼峰出现；
5.将甲醇换为乙腈，同样的梯度同样的柱子，无鬼峰出现；
6.另外排除进样阀污染的原因，因为在以上实验过程中都没有进样，走的空白针。
PS:我现在做的样品只有用甲醇有比较好的分离效果，不能换用乙腈及其它试剂～
昨天打电话咨询了Agilent的工程师，工程师的意见是：猜测可能是水中杂质吸附在柱头，高比例甲醇时被冲洗出来；另外乙腈可能不能洗脱该杂质；而等度洗脱和用两通时，杂质不会被吸附；
今天和几个老师讨论了这个问题，有个老师的意见是有没有可能是梯度洗脱方法问题，从高比例的甲醇到更高比例的甲醇造成～请教有没有做梯度洗脱的朋友有类似的经验～感谢大家～
PS：现在做的是一个有关物质的方法，主峰在20多分钟出峰，用梯度洗脱的原因是大多数中间体是在主峰后面出峰，其中有一个中间体在该梯度方法中要到57min才出峰，也就是出峰是在鬼峰之后。
