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标题:哪里的taq酶保真度高,还可以直接TA克隆

韩梅梅[使用道具]
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请问能保证只加一个A吗?
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韩梅梅[使用道具]
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高保真的taq,里面只是混合了一些pfu,T/A克隆同样可以做
而且对750bp不应该产生如此多突变,你的退火温度提高一些
另:对测序结果怀疑ing
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椰子叶子[使用道具]
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高保真与加A是一对矛盾,高保真酶具有3’-5‘外切活性,会把A切掉,绝大多数产物是平端。但是保真性要求是第一位的,加A操作是很容易的。
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椰子叶子[使用道具]
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请问能保证只加一个A吗?

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当然,这是由酶的性质决定的
加A是聚合酶的不依赖模板的末端转移酶活性造成的,这种活性是在按照模板合成完互补链后在3’末端添加一个碱基。在ACGT四种核苷酸存在时,优先选择A。在只有一种碱基可供选择时,则添加该种核苷酸。
于是发明了利用平端酶线形化载体质粒然后用Taq酶加T的T-vector技术。
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