PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】qPCR标准曲线制作

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】qPCR标准曲线制作

薄荷侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79372
精华 0
积分 186
帖子 112
信誉分 100
可用分 1311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
1

发表于 2015-10-7 10:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】qPCR标准曲线制作


请问qPCR标准曲线该如何制作呢？是将cDNA模板稀释5个浓度，然后跑内参和目的基因吗？还是只用跑内参？横坐标和纵坐标又都是什么呢？求解！
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
2

发表于 2015-10-7 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是做绝对定量？还是相对定量？如果是相对定量的话，最好稀释5个浓度以上，我一般稀释7个，目的基因和内参都需要做的，主要是为了看目的基因和内参基因扩增效率是否一致。希望对你有用
顶部
woshi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117885
精华 0
积分 467
帖子 674
信誉分 100
可用分 4121
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
3

发表于 2015-10-7 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
内参和目的基因都需要跑
横坐标是你设定的每个点的量值，纵坐标是CT值
顶部
薄荷侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79372
精华 0
积分 186
帖子 112
信誉分 100
可用分 1311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
4

发表于 2015-10-7 10:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 woshi 于 2015-10-7 10:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
内参和目的基因都需要跑
横坐标是你设定的每个点的量值，纵坐标是CT值

量值是指什么啊？
顶部
薄荷侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79372
精华 0
积分 186
帖子 112
信誉分 100
可用分 1311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
5

发表于 2015-10-7 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 u234 于 2015-10-7 10:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你是做绝对定量？还是相对定量？如果是相对定量的话，最好稀释5个浓度以上，我一般稀释7个，目的基因和内参都需要做的，主要是为了看目的基因和内参基因扩增效率是否一致。希望对你有用 ...

谢谢！因第一次做，还是又问题没弄懂：提RNA，逆转录为cDNA后必须测cDNA浓度吗？就按稀释体积来1X,2X,4X,8X,16，32X,64X，这样稀释行吗？横坐标，纵坐标又都是什么呢？ 期待您的回答
顶部
黄花菜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79384
精华 0
积分 235
帖子 209
信誉分 100
可用分 1801
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
6

发表于 2015-10-7 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
cDNA没必要测浓度，因为你做相对定量，最好按2的n次方稀释纵横坐标是ct值和浓度
顶部
薄荷侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79372
精华 0
积分 186
帖子 112
信誉分 100
可用分 1311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
7

发表于 2015-10-7 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“纵横坐标是ct值和浓度”是指纵坐标是ct值，横坐标是浓度？浓度不是说不用测，那这里的浓度是指？
顶部
阿拉蕾[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 69963
精华 0
积分 511
帖子 701
信誉分 100
可用分 4251
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-3
状态 离线
8

发表于 2015-10-7 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 woshi 于 2015-10-7 10:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
内参和目的基因都需要跑
横坐标是你设定的每个点的量值，纵坐标是CT值

可能我没太说清楚，横坐标是拷贝数，就是在设定标准曲线各个孔时候设的。
另外， cDNA不需要测浓度，直接稀释就可以了。
几倍稀释是要看你标准曲线的第一个点的CT值，和样品的CT值分布，至少要五个点，至少5倍稀释，太少的倍数就不准了。
稀释标准品的时候要用专用的稀释液，不能用水或TE
顶部
薄荷侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79372
精华 0
积分 186
帖子 112
信誉分 100
可用分 1311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
9

发表于 2015-10-7 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 阿拉蕾 于 2015-10-7 10:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可能我没太说清楚，横坐标是拷贝数，就是在设定标准曲线各个孔时候设的。
另外， cDNA不需要测浓度，直接稀释就可以了。
几倍稀释是要看你标准曲线的第一个点的CT值，和样品的CT值分布，至少要五个点，至少5倍稀释，太少的倍数就不 ...

拷贝数是怎么设定的呢？能麻烦举个例子吗？
顶部
txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
10

发表于 2015-10-7 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道您用的是什么定量仪器，一般都是在仪器自带的软件上就能设定（比如takara的定量仪器）。
顶部
 14  1/2 12››