小中大【分享帖】RT-PCR前用DNase消化去除基因组DNA污染
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Realtime PCR中存在的基因组DNA的污染，可以在逆转录前用DNase消化来解决。具体过程：
（试剂用的是PROMEGA公司的RQ1 RNase-Free DNase，因是实验室公用试剂，价格我也不清楚。）
测得RNA浓度后，开始进行。
反应体系：
10*buffer 1ul
DNase 2ul
RNA 2ug(RNA浓度过大时，可以用4ug量，此时对应的DNase 4ul）
DEPC处理水 to 10ul
反应条件：37°C 30min 暂停，立即将产物置冰上，每管加RQ1 DNase Stop Solution 1ul(4ugRNA的体系也是1ul)，再65°C 10min即可。
再做逆转录时，如果用1ugRNA进行逆转录，那么只要加处理后的RNA5.5ul（2ugRNA进行DNase消化，总体系时10+1=11ul，故1ug为5.5ul；同样，若是取4ug进行DNase消化，那么逆转录所用1ugRNA的量就是1/4*11ul=2.75ul）。
需要注意的是：37°C 30min是DNase起作用的时间，时间一到，就放冰上。如果设置程序后面紧接着65°这一步，一定要注意温度变化之前取出置冰上。（我在这时候准备逆转录的母液配置）
另外，引物设计的好，也能有效避免基因组DNA片段的扩增。
