小中大这个文章算是经典了，呵呵，大家都提到它，我看到方法中用的试剂是：
1× RT buffer (P/N: 4319981, Applied Biosystems),
0.25 U/ml RNase inhibitor (P/N: N8080119; Applied Biosystems).
3.33 U/ml MultiScribe reverse transcriptase (P/N: 4319983, Applied Biosystems) ，
不知用普通的反转录试剂是否可以，我们之前做基因的定量时用的是promega的MLV反转录酶，当然Buffer就是配套的，RNase inhibitor 用的是Takara的不知是否合适？
另外，我看了taqman探针法的体系，想问一下如果用sbygreen的方法，体系上有什么参考吗？
在设计上游引物时我看到大部分序列就是miRNA的序列，就是在5'端加了一些碱基，查了一下说是提高TM值，但我发现有的上下游引物相差超过5度了（我用primer express 上的计算的），所以不知道上游引物5’端添加的碱基是否有些要遵循的原则？
还有就是想问一下引物设计好合成的时候，对纯化方式是否有要求呢？我在做基因表达时就是在上海生工合的，一般都是page纯化，然后3OD的量，miRNA的上游引物也可以这样合吗？
谢谢！
