进样不出主峰，是什么原因呢？

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标题:[未解决]进样不出主峰，是什么原因呢？

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发表于 2011-9-19 08:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用的是梯度，流动相过渡到纯乙腈里。在流动相过渡到乙腈的时候，有个大的不太规则的峰，和之前一样，但在流动相中不出主峰。柱子和流动相都重新换过，还是不出峰，应该不是这两个问题。泵有问题，当在流动相（含有缓冲盐）中的时候，压力不断的上升，0.8流速，压力将近30兆帕，泵输液的时候，声音很大，壳嘣壳嘣的响。

naren4545[使用道具]
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发表于 2011-9-19 09:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的方法有问题，可以告诉我具体是什么吗？

Erica2088wr[使用道具]
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发表于 2011-9-19 11:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

缓冲盐浓度不要太高
控制在1mM左右
还有样品的检测是选择的最大紫外吸收波长处么
样品的浓度够高么

JJSIE--NNE[使用道具]
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发表于 2011-9-19 11:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该是流动相极性不够，调大极性试试，含有缓冲盐时，压力本来就会变大，正常。

woaifou[使用道具]
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发表于 2011-9-19 11:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是缓冲盐堵在柱子里面了或者是purge阀那里堵住了
流动相里有缓冲盐一定要较长时间用流动相冲
如果是系统堵住了就比较麻烦了就要一一排除是哪部分堵了流动相的滤头也可以拆下来洗超声

aasle[使用道具]
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发表于 2011-9-19 11:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

怀疑样品没有被冲出柱子，要不然就是检测波长设置的问题
可以将柱子倒过来，用小流速，0.2左右，长时间冲洗，用梯度洗脱，此外最好不要全部用纯水或是纯的有机溶剂，一般最少要有2%的水相，另外也有可能是你的梯度洗脱没有设置好，梯度洗脱的设置是很有要求的，不是随便设个百分之几十到百分之几十的这样，此外每个梯度洗脱多有，换梯度的时间是多久都不是随意的，这很有可能是你的样品不出峰的原因，梯度洗脱的设置，还是要先看文献，类似的样品，把别人已经设置好的梯度拿来用，再根据自己的具体情况稍加改动

QUOTE:

原帖由 分析工 于 2011-9-19 08:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
用的是梯度，流动相过渡到纯乙腈里。在流动相过渡到乙腈的时候，有个大的不太规则的峰，和之前一样，但在流动相中不出主峰。柱子和流动相都重新换过，还是不出峰，应该不是这两个问题。泵有问题，当在流动相（含有缓冲盐）中的时候，压力 ...

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发表于 2011-9-19 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 分析工的帖子

“在流动相过渡到乙腈的时候，有个大的不太规则的峰，和之前一样，但在流动相中不出主峰。”没看明白什么意思！
建议写色谱条件，上空白图，上标准品溶液图，上样品溶液图。

HEC_css[使用道具]
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发表于 2011-9-19 17:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

30MPa你还用啊？是UPLC吗？如果只是普通的HPLC，可能柱子已经有问题了。缓冲盐时不好直接过渡到纯乙腈的，可能会造成盐析出。一定要用不含缓冲盐的流动相过渡的。

分析工[使用道具]
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发表于 2011-9-20 19:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的检测器的波长是190-700nm，灯源是氘灯和钨灯，被检测物质在440nm波长下出峰，有可能是钨灯坏了，同时泵也有问题，等待厂家维修，谢谢大家给予帮助。

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发表于 2011-10-1 21:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先检查一下泵是否有问题吧，可能是泵有机相的那个泵出问题了，极性不够，样品出不来了吧。

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