PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于real time PCR的数据处理

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】关于real time PCR的数据处理

PCR[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74238
精华 0
积分 414
帖子 448
信誉分 100
可用分 3201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
1

发表于 2015-10-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于real time PCR的数据处理


关于real time PCR的数据处理,我也很感兴趣，然而，为何没有大侠答复呢？
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
2

发表于 2015-10-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是呀，恳请各位高手指点一下呀。我非常想知道绝对定量的统计处理方法。现在手头的收据一大堆，很是着急呀。
顶部
PCR[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74238
精华 0
积分 414
帖子 448
信誉分 100
可用分 3201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
3

发表于 2015-10-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

慢慢来，最慢就是最快，多看类似REAL TIME 的参考文献，他山之石，可以攻玉，您
就会时时心生智慧。GOOD LUCKY TO YOU。
MANY THANKS,BEAUTY LIFE WITH BEAUTY HEART ;GOOD PERSON WITH BEST DREAM.
Please email:cgca2002@163.com
BEST REGARDS,
CGC NEARTU
顶部
xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
4

发表于 2015-10-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“用确定拷贝数的稀释的标准品进行反应，作出标准曲线。将待测样品反应结束后，获得反应的Ct值，代入标准曲线，求得拷贝数。”了解的也就这么多，不知道对你有没有用？
顶部
PCR[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74238
精华 0
积分 414
帖子 448
信誉分 100
可用分 3201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
5

发表于 2015-10-9 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

I SEE ,
MANY THANKS
CGC NEARTU
顶部
xyw5[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75137
精华 1
积分 620
帖子 815
信誉分 102
可用分 4991
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
6

发表于 2015-10-9 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
荧光定量PCR结果分析：
荧光染料SYBR® Green I结合双链DNA后，可被激发出荧光，荧光强度与双链DNA的量成正比，PCR反应扩增cDNA，随着循环次数增多，cDNA产物也越来越多，激发出的荧光就越强，荧光强度增加到可被检测出时所需要的PCR循环次数即为循环阈值（CT），CT出现于PCR反应指数增长期，它与样本中模板分子的起始数量成反比，即样本的起始拷贝数越多，则在PCR反应时使荧光强度达到被检测出的水平所需要的时间越少，需要的循环次数也越少，CT越小，而起始拷贝数越少，则CT越大。
处理组样本基因的数量用相对定量的方法来表示，即先用参照基因β-actin的数量进行标准化，然后和对照组样本基因进行比较。具体方法是：先分别获得样本基因和参照基因CT的平均值即均值CT，用处理组样本基因的均值CT减去处理组参照基因的均值CT，得到ΔCT（1），即ΔCT（1）＝（处理组样本基因均值CT-处理组参照基因均值CT），；同样，用对照组样本基因的均值CT减去对照组参照基因的均值CT，得到ΔCT（2），即ΔCT（2）＝（对照组样本基因均值CT-对照组参照基因均值CT），然后用ΔCT（1）减去ΔCT（2），得到ΔΔCT，即ΔΔCT＝ΔCT（1）-ΔCT（2） 最终，处理组样本基因相对于对照组样本基因的量通过公式2-（ΔΔCT）计算得到。
顶部
xuuuu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118128
精华 1
积分 444
帖子 503
信誉分 102
可用分 3386
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态 离线
7

发表于 2015-10-9 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的这种方法有文献支持吗?因为我就是用你说的这种方法做相对定量的,最后做的拄形图都向下,因为我的目的基因表达量比看家基因少,CT值相减是负的.期待着你的回音!!
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
8

发表于 2015-10-9 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个相对定量的计算方法有文献支持的，在Methods杂志上有介绍的。但是，结果肯定是大于零的。虽然“目的基因表达量比看家基因少”，与结果是没关系的。如果你的目的基因表达是上升的趋势，结果大于1；反之，则结果大于零小于1。绝对不会出现负数，因为最后求的是2的幂，没有小于零的可能。
顶部
131415[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74126
精华 0
积分 565
帖子 789
信誉分 100
可用分 4798
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
9

发表于 2015-10-9 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也就是说，在同一时间点的比较可以用上述公式（4个数据）。
请教大家，如何分析处理组及对照组随时相的改变呢？
简单点，引入时间因素，某处理方式下一定时间，比较两个时间点间某基因的表达水平（8个数据）？该用那个公式？
Time1: taget gene CT 处理 CT 对照
Actin CT 处理 CT 对照
Time2: taget gene CT 处理 CT 对照
Actin CT 处理 CT 对照
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
10

发表于 2015-10-9 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要求解释绝对定量的结果统计方法
顶部