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刚开始做RT-PCR，虽然前面的一帆风顺，可是最近却又受挫连连，小结一下，防其他战友走老的弯路!
1 正如上面师兄们所说的RNA的提取十分重要，这是基础，后面的一切均是在这个基础上累计出来的。
2 注意所用的的东西如EP管、tip头等等一定要用DEPC水（0.1%）泡至少一天，然后在高压灭菌锅中消毒灭菌。之后就是在烘箱中烤干，一般两天后再用最好。
3 操作时要带上橡胶手套，时刻提防RNA的降解。最好戴上口罩，要不就少说话。
4 所加体系可以少一点，我们实验室一般是RT20ul体系，PCR25ul体系。所用到的试剂也相应减半。
5 体系中的各个试剂的量是有一定的规律的，任何一种都不能过多或过少，对于摸索阶段可以尝试几个梯度来做，主要就是dNTP、Mg离子浓度。有时候我们也尝试改变所用的Buffer来进行PCR。例如用buffer viii，即是5*buffer，效果会好一点。
6 跑胶一般用90V即可，时间可以伸缩。胶的浓度要看所检验的东西，一般RNA是用1%、DNA用2.5%
7 一定要用心，实验是需要有感情投入的！
