【求助】关于DEPC水的配制

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标题:【求助】关于DEPC水的配制

moonlight45[使用道具]
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发表于 2015-10-9 11:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小弟近来做RT-PCR的试验，需要处理一批枪头和离心管。但是有几个问题：
1、文章说以上耗材需要经DECP水浸泡再烤干，高温压灭菌后备用。那么DEPC水如何配置呢？多少浓度合适呢？另外可以重复使用吗？
2、有些病人RNA提取液后加氯仿后上清很粘稠，不大好吸。有什么好办法处理呢？
3、因抗凝剂没有混匀导致的凝血，这样的标本能不能使用呢？
4、抗凝剂只能用EDTA吗？使用橘园酸钠可以吗？最长可以保存多就呢？
谢谢了！

idea2011[使用道具]
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发表于 2015-10-9 11:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DEPC水一般是千分之一的浓度，即1mlDEPC原液+999ml二蒸水即可，但是配置过程中一定带口罩和手套，有条件的话在通风厨里进行，因为DEPC有致癌性。我做RT_PCR时耗材没有用这个泡，一般高压消毒即可，别人这样做也没有事情。至于其他的问题我没有接触到，不好回答，好像抗凝剂不止这个还可以用肝素吧。

xevin[使用道具]
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发表于 2015-10-9 11:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.DEPC水可以重复使用,最好用DEPC水处理,因为这样的话万一提不出来,可考虑的原因就少了.
2. 可以多加点氯仿,多离心一次,这样可以提高RNA的纯度,或将上清移到另一EP管里,再离心几分钟.
3. 这样的标本可以用的,因为你不是测离子,蛋白的浓度,RNA本身就要使细胞裂解吗.
4.这个问题不太清楚,不过没听说用橘园酸钠,最好查查看它是否对RNA有影响,因为试剂的离子浓度,PH值都对RNA有影响的.

moonlight45[使用道具]
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发表于 2015-10-9 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不用DEPC水泡也可以吗？我一定要试试了。
另外你说做mRNA的提取，抗凝剂可以用肝素吗？我怎么听说是除了肝素，其他抗凝剂都可以使用呢？盼赐教！谢谢

misswu61[使用道具]
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发表于 2015-10-9 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2、有些病人RNA提取液后加氯仿后上清很粘稠，不大好吸。有什么好办法处理呢？

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很简单啊，把抢头的尖头剪掉一点就可以了

moonlight45[使用道具]
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