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标题:【求助】电泳配胶的问题

JK.jon[使用道具]
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【求助】电泳配胶的问题


请教各位老师,如何配胶才能使胶孔最好呢?看看我配的胶,总是歪歪扭扭的,跑出的条带更是歪歪扭扭,放在微波炉里溶胶最好是多长时间呢?还有就是等到什么时候拔梳子是最佳时间呢?
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JK.jon[使用道具]
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各位看看我配的胶结果是这个样子的:


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2015-10-9 11:09
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qhyu[使用道具]
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跑电泳的时候注意以下几点:
1、胶的浓度不要太小。如果浓度比较小,倒胶的时候可以倒厚点。
2、溶胶要充分。具体时间不好说,我一般是等胶透明后就取出(这时候还有许多透明的颗粒),然后多摇一摇,直到看不到颗粒为止(特别要注意,透明的颗粒也不能有)。配好的胶再溶的时候也应充分,一般2、3分钟吧(得看情况来定,胶多就多溶一会儿,胶少就少溶一会儿),也得多摇一摇,使所有的团块都融化。
3、倒胶前应先洗掉梳子上残留的胶;倒胶的时候要一气呵成。
4、要等胶充分凝固后才能拔梳子(我一般至少要等40分钟左右)。拔梳子的时候要轻柔,不能太快。
5、加样的时候,最好不要把Tip头伸进上样孔中(当然,如果上样孔比较大,伸进上样孔也行,但最好不要接触上样孔四周的胶),因为这样很容易使上样孔变形。应该将Tip头伸到液面下、上样孔正上方、几乎接近上样孔,缓慢上样,让样品自己沉降到上样孔中。
一点愚见,不一定正确。
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JK.jon[使用道具]
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4
 
我一般都是1.5%,2%的胶,100ml,每次从微波炉里拿出来都是一摇就好多起泡,也看不到什么透明颗粒啊,一般我都煮到不再沸腾后,大概3分半钟,是不是太久了?
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yizhi[使用道具]
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只要不喷出来,胶烧得稍久点没有什么影响的!
时间太久也只是要考虑水分蒸发的问题!
拿出来你先摇,然后冷却,泡消失后再倒胶,倒胶的时候有气泡对你的结果影响可就大了!
有的条带还可以,其他的是不是可以考虑一下上样量太多了!
marker是歪的,是不是胶不均匀!
即供参考!
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制胶还是要经验丰富才行。
从我做胶的过程来看,我觉得有一下几点可供参考:
1、用微波炉加热不能冒泡太厉害,一般是看到它在开始冒泡的时候就可以先关掉,取出烧杯看琼脂糖是否已全部熔化,标准是看液体是否均一,如果不行再加热一次。两次绝对就可以了。
2、到胶若出现气泡应想办法去掉,带气泡跑电泳十绝对不行的,在边上没太大问题。有气泡的话可以用移液枪把它吸掉。
3、电压宜低不宜高,一般5V/cm。
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应该是混胶不匀的问题。
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HP007[使用道具]
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您的意思是混胶不匀,那具体做的时候应该怎么注意才能避免呢?谢谢你
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bojitu[使用道具]
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9
 

把胶配好后放在微波炉里烧开一看见冒泡就关掉微波炉(一定要自己在那儿盯着,呵呵),然后再打开,反复几次仔细看一下胶和瓶子上面的附着的颗粒很透明熔化就可以了。
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gogo[使用道具]
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点完样后不要马上跑,静置几分钟。
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