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标题:【求助】电泳配胶的问题

yayya[使用道具]
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以上大家都说了很多好的方法,我在补充点个人意见,可做参考,
1拔梳子前备一吸管,从电泳槽中吸缓冲液沿梳子两侧冲一下,液体流回电泳槽,然后缓慢拔出梳子
2梳子固定牢稳,可靠个支撑物防止灌胶时梳子歪倒
3一般100ml2-3分钟,50ml1-2分钟,最好看着防沸腾喷出
4胶不要太凉,用纸拿着不烫手时应该就可以灌
5从一角缓慢灌入,扶住梳子
以上几点小建议,结合以上各位的高见,可以拔出光滑的孔,得到一块完美胶!
嘿嘿
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memory[使用道具]
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点完样不要马上跑,要静置几分钟,为什么啊?这样,样品不就扩散了吗?
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koook5695[使用道具]
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上完样后放置一到两分钟比较好,也不会扩散那么快拉。
放置一会的好处是让样品都沉到底部,跑出来的胶会整齐一些,当然好看拉。
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ns5fan[使用道具]
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需要放那么久吗?不会扩散吗?一个25孔的胶从头上到尾前面已经扩散了,再说加了上样缓冲液就可以把DNA沉淀的很好了呀?
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guagua[使用道具]
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跑电泳的时候注意以下几点:
1、胶的浓度不要太小。如果浓度比较小,倒胶的时候可以倒厚点。
2、溶胶要充分。具体时间不好说,我一般是等胶透明后就取出(这时候还有许多透明的颗粒),然后多摇一摇,直到看不到颗粒为止(特别要注意,透明的颗粒也不能有)。配好的胶再溶的时候也应充分,一般2、3分钟吧(得看情况来定,胶多就多溶一会儿,胶少就少溶一会儿),也得多摇一摇,使所有的团块都融化。
3、倒胶前应先洗掉梳子上残留的胶;倒胶的时候要一气呵成。
4、要等胶充分凝固后才能拔梳子(我一般至少要等40分钟左右)。拔梳子的时候要轻柔,不能太快。
5、加样的时候,最好不要把Tip头伸进上样孔中(当然,如果上样孔比较大,伸进上样孔也行,但最好不要接触上样孔四周的胶),因为这样很容易使上样孔变形。应该将Tip头伸到液面下、上样孔正上方、几乎接近上样孔,缓慢上样,让样品自己沉降到上样孔中。
一点愚见,不一定正确。
......

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SDS-PAGE电泳跑的图都花了,条带也歪了,MARKER也歪了。胶凝的挺好的,不知道什么原因,大概是什么原因啊?希望各位大神给予帮助~~
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