小中大很高兴有人看过我得帖子,我不巧就是那个白痴。很久没有上来,实在抱歉。
不过可惜的是不是笔误!!!
:“一般的琼脂糖凝胶电泳,注意不要用甲醛变性电泳(又不是做northern,实在没
有必要). 电泳槽注意一定不要用DEPC处理,一定要保证电泳体系中有少量的
RNAase存在.”
我想您没有仔细看我得帖子或者是没有看懂,我把链接再给大家一下,大家可以
仔细看看。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=1987203&sty=1&tpg=1&age=0')
我不知道这是笔误还是另有道理,为什么要保证电泳体系中有少量的RNAase存在
呢?
在我心目中我得答案是另有道理。呵呵
RNAase的作用是降解RNA,怎么会要保证电泳体系中有少量的RNAase存在?本来提
取RNA的时候就应该严格操作,尽量避免降解。因此,我认为那位师兄说的不对。
您说得很对。 不过提取RNA电泳严格操作,避免降解这部分是对的。 RNA电泳
适合不是抽提RNA的步骤吧。
但是一般琼脂糖电泳都是检测DNA的条带。
???似乎没有这种说法吧!!!
呵呵,你的师兄说的是DNA凝胶电泳吧,因为跑DNA电泳不需要经过特殊处理的。
一般用琼脂糖凝胶来跑RNA只是平常用来快速检测RNA提取的质量及数量的。所用
的试剂及电泳槽都需要经过特殊处理的。电泳槽可以不用DEPC处理,因为那样处
理是不够干净的,你可以用市售的氯仿仔细擦拭电泳槽,然后再用70%的无RNAase
的乙醇再擦拭一遍。这样就省事省钱啦。另外在电泳时可以加入EB来一起跑,跑
完后就可以立刻看胶了,也可以另外处理一个托盘来进行RNA电泳的EB染色,要不
然没等你跑完你的RNA就没了哦。
这位同志说得很正确,我几乎完全同意。不过最后一句实在不敢苟同。 我跑了这
么多次,还教这么多人跑了这么多次没有一次降解的,关键是快速电泳结束,哪
里会那么快降解的。不信自己做个对照实验呵呵。 往往困扰我得是降解的太慢,
影响我对是否有DNA污染的快速判断(紫外比色方法判断实在不准,建议大家慎用
)
TAE就非常好用了,不用其他buffer