【求助】为什么我只有溶解曲线，而没有扩增曲线？ - 经验共享

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标题:【求助】为什么我只有溶解曲线，而没有扩增曲线？

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 TNT 于 2015-10-9 17:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你下载附件后解压，2张图可以直接打开，1个文件用SDS软件打开，可以看到条件设置，并可以数据分析（上面发错了，忘了+附件）
请帮忙看看我的数据,没有基线,怎么感觉曲线那么不好呢?
还有要做溶解曲线,操作步骤是什么? ...

首先对你的帮助表示感谢，但我用的仪器和你不同，所以你的图对我的帮助不大。

SO2[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

能把你的实验原文件发上来吗，我用软件打开再分析下，单从这几张图上开不出问题在哪儿。

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 SO2 于 2015-10-9 17:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
能把你的实验原文件发上来吗，我用软件打开再分析下，单从这几张图上开不出问题在哪儿。

主要问题我现在已经解决了,只要将reference dye改为none 就可以了.
但现在还有个疑问,就是我第一次做的按这样改还是只有溶解曲线,而扩增曲线在fluorescence下选择dRn和Rn是都没有结果的,当然text report也是没有结果的.

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

补充一下,第一排是一个基因,第二排是另外一个.第二排的溶解曲线做的还行,你就先看第二排的结果吧.

了了[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主已经做出曲线来了，似乎只是结果分析问题了，建议把仪器说明书翻一翻，或者找同实验室会用那个仪器的人，很快就能得到需要的答案．

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的第一排的溶解曲线不是很理想,是更换引物好,还是优化条件,或者用其他什么方法解决 ?

65urh[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 fox_79 于 2015-10-9 17:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我的第一排的溶解曲线不是很理想,是更换引物好,还是优化条件,或者用其他什么方法解决 ?

从溶解曲线上看，似乎没有引物二聚体的影响，主要还是非特异性扩增，而且Tm值跟目标扩增产物的Tm值较接近，这样看来，优化条件改善结果的可能性不大，个人建议还是从引物上解决问题。

65urh[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

补充一点：
分析时有R,Rn,dR,dRn，分别是原始荧光信号、归一化的荧光信号、消除背景的荧光信号和归一化的消除背景的荧光信号，个人认为使用dR和dRn均可。

fox_79[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 65urh 于 2015-10-9 17:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

补充一点：
分析时有R,Rn,dR,dRn，分别是原始荧光信号、归一化的荧光信号、消除背景的荧光信号和归一化的消除背景的荧光信号，个人认为使用dR和dRn均可。 ...

我一直也很困惑这4者之间的意义及区别，谢谢！

c86v[使用道具]
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发表于 2015-10-9 17:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求教，real time PCR跑不出曲线，却有CT值，求教啊

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