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标题:【分享帖】实验进度--从一个菜鸟开始

wiwi[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 @STAR@ 于 2015-10-10 16:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼上的兄弟,你的内参跑出来了没?

内参当时没抗体了,没做。再做一定要加内参。正在买抗体。
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wiwi[使用道具]
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最近除了跑PCR之外,主要的事情就是写文章。
实验室的PCR仪坏了,开机总是显示UNIT FAILURE,宝诚的机子。公司拿回去修理,说是主板坏了,要两万元。剩下的就是等待。宝诚修理PCR仪很慢,以前我们实验室这台PCR修过一次,用了四个多月才修好。
现在用跑定量的PCR来跑普通的PCR,然后测序。感觉大材小用。
实验室的师兄连着发了两篇meta-analysis,这让还没有SCI的我,倍感压力。投稿的YMJ,总是每天登录上去看状态,一直是view。不敢催稿,等待的过程中心里基本都是不乐观的想法。新的文章,总是写着写着就卡壳,不知道自己到底是要写一个什么样的结论。无论如何,一定要写出来。同时,也想尝试着去写meta,多会点东西,总是好的。
老板要求把实验流程全部流程化,感觉有难度。实验步骤,也没在电脑上打成WORD版本。有很多事要做,希望自己能有自信。没自信的时候,很多事,感觉都做不下去了。
希望文章有消息。给我一个激励吧!煎熬大半年了。
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eric930[使用道具]
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可以直接保存外周血,待用时再提取DNA行多态性检查吗?我现在好郁闷啊,老板没有给课题方向,自己找,太迷茫了啊
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eric930[使用道具]
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还有咨询一下,用流式细胞仪检查细胞受体表达情况,外周血怎么保存,非常感谢
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xevin[使用道具]
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WB 用的蛋白ladder 买了Fermentas的, 一支250ul, 价格280元。 每次上样10ul,条带非常好。推荐下。

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其实4-5ul足够了 别浪费 亲
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从临床收特定的标本。做基因和蛋白检测。文章要是写的好,估计还可以写两篇临床的文章。我们实验室的师姐和师兄有不少人剑走偏锋,边做实验,边找临床资料,发SCI。或者直接写META。我写文章的功力有点差,一篇中文的综述,连写带改,就来回折腾了四个月。
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wiwi[使用道具]
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外周血可以直接冻到-80°的冰箱。抽提DNA效果还不错。
试剂盒我以前用的是AXYGEN。前段时间很奢侈地用了一个QIAGEN的。最近换成了Roche的。都提得出来。
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wiwi[使用道具]
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还有咨询一下,用流式细胞仪检查细胞受体表达情况,外周血怎么保存,非常感谢

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流式细胞仪检测,我们外周血都是当天的。有时候可以用4°冰箱放到第二天,但是细胞碎片会大大增多,抗体检测结果会有不小的误差。
如果你一定要保存,建议把单个核细胞分离之后,冻存盒冻过,然后放液氮。之后用的时候,再复苏细胞。不过复苏之后的细胞,状态常常很不好,要养好,得在培养基里加特定的细胞因子。这种方法太烧钱,我自己没用。我们实验室有老师用过,后来也放弃了。
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wiwi[使用道具]
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其实4-5ul足够了 别浪费 亲

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了解。刚开始做,怕没条带,特意加足量。条件摸好后,肯定得减量。省钱是做实验的一条常规。
多谢提醒。
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yapuyapu[使用道具]
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楼主一直都很努力,加油!
做PCR时引物设计好难搞定啊,最近要做普通PCR,引物弄了好几天了也没个头绪,文献里的引物也不知道是个什么情况,唉,总感觉做实验好想大多数时间都是自己在自学
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