【求助】CHO细胞生产蛋白

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标题:【求助】CHO细胞生产蛋白

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

现在要开始做CHO细胞生产单抗，刚开始做小试实验，刚来的时候同事是用普通培基养的，且是贴壁的。查阅文献，抗体生产时都是用的悬浮细胞，提高产量。那我现在的细胞如何驯化呢？

duchy[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

思路就是采用悬浮培养基与原来培养基按照一定比例搭配，设计系列比例，逐渐降低原来培养基、提高悬浮培养基比例培养到适应为止。

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那是以什么做为准则呢？细胞状态，形态，还是蛋白表达量？我们有无血清配基，悬浮配基是特定的吗？！多谢！

ALALA[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

每种细胞都不一样的，有的适应性好，替换频率可以快一点，有的不能一次替换太多，一般的话一天10%到20%左右应该还好的，主要就看你的细胞活率，细胞状态，葡萄糖乳酸等

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ALALA 于 2015-10-12 14:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

每种细胞都不一样的，有的适应性好，替换频率可以快一点，有的不能一次替换太多，一般的话一天10%到20%左右应该还好的，主要就看你的细胞活率，细胞状态，葡萄糖乳酸等 ...

请问站友，你有这方面的相关资料可以推荐吗？自己查阅的有点大海捞针的赶脚，有些不知所措啊！多谢！

seagate[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

劝你还是不要自己驯化了，驯化出来的悬浮细胞，你能保证稳定，高产，且生长正常，不仅耗时，而且往往没有结果！你们还是直接买悬浮细胞自己重新构建吧！

join[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

例如90%原来培养基+10%新培养基，培养几天，依次提高新培养基比例，直到适应；
例如50%原来培养基+50%新培养基，培养几天，依次降低，直到适应；
这个是你自己设计的，没有一个固定的做法。
主要指标：细胞状态包括形态、生长速度、活力、稳定性。表达量本来在不同培养基就不一样，但是要考虑更换培养基后要表达稳定。
细胞驯化没那么难的，需要考虑的是驯化后稳定性是否好，另外如果原来的细胞株的来源信息不清楚，不如早点更换为悬浮细胞，重新来，但是如果原来的细胞株来源证明文件均有的话，那可以考虑驯化。

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 join 于 2015-10-12 14:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

例如90%原来培养基+10%新培养基，培养几天，依次提高新培养基比例，直到适应；
例如50%原来培养基+50%新培养基，培养几天，依次降低，直到适应；
这个是你自己设计的，没有一个固定的做法。
主要指标：细胞状态包括形态、生长速度、活力 ...

多谢站友，帮我解决了一点疑惑！这个细胞之前是另外一位同事接收处理的，我再找找问问吧！
另外，现在需要这个贴壁的细胞表达些蛋白，简单去做个纯化，以摸索我们之后的纯化条件，那我种细胞之后，什么时候收蛋白比较合适，有具体一个标准吗？还是自己去摸索不同时间的表达产量？谢谢！

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 seagate 于 2015-10-12 14:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
劝你还是不要自己驯化了，驯化出来的悬浮细胞，你能保证稳定，高产，且生长正常，不仅耗时，而且往往没有结果！你们还是直接买悬浮细胞自己重新构建吧！ ...

但相比驯化，觉得重新构建更难，前期的分子克隆转染，再加筛选，自己做步骤还是很多的。给外包公司费用太高。