【求助】求助

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标题:【求助】求助

ritou1985[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们有一个单抗项目用的是连续灌注培养，现在的情况是摇瓶中模拟灌注表达量能达到0.8g/L·Day，接入反应器后表达只有0.4左右，摸索了很久都不见效。想请教各位站友，除了培养基和细胞，在perfusion工艺中提高表达的关键参数有哪些？

gogo[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

摇瓶模拟的参数很多是不可控的，还是要以反应器为准。
严谨的话，建议使用微型生物反应器或者小联罐进行平行测试，才能保证参数的合理和准确。
不知道楼主用的是不是CD培养基呢？为什么要用perfusion呢，一般抗体还是fed-batch的。

xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gogo 于 2015-10-12 14:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

摇瓶模拟的参数很多是不可控的，还是要以反应器为准。
严谨的话，建议使用微型生物反应器或者小联罐进行平行测试，才能保证参数的合理和准确。
不知道楼主用的是不是CD培养基呢？为什么要用perfusion呢，一般抗体还是fed-batc ...

先检测一下在罐里细胞糖耗和乳酸是否有异常（和摇瓶数据比较），还有细胞密度有没有差异（你的摇瓶和罐子细胞密度达到多少？），可能涉及的参数是转速和溶氧。培养的宿主细胞是CHO吗？

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xuuuu 于 2015-10-12 14:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

先检测一下在罐里细胞糖耗和乳酸是否有异常（和摇瓶数据比较），还有细胞密度有没有差异（你的摇瓶和罐子细胞密度达到多少？），可能涉及的参数是转速和溶氧。培养的宿主细胞是CHO吗？ ...

CHO表达，葡糖和乳酸测定都正常，摇瓶和罐子细胞密度都控制在15~20million，罐子DO 50%，转速维持细胞悬浮不结团。

Darcy[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多大的摇瓶，摇床有湿度控制么，一般小摇的蒸发量比较大，而且摇瓶和反应器本来就环境差别很多。另外，DO一般不是限速条件，是不是pH的差别。细胞什么系统，DHFR还是GS系统的。DHFR系统还要考虑谷氨酰胺和铵离子。

bling[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

CHO表达，葡糖和乳酸测定都正常，摇瓶和罐子细胞密度都控制在15~20million，罐子DO 50%，转速维持细胞悬浮不结团。

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这个密度，你做灌流培养，细胞截留怎么解决呢？

linlinstar[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、建议降低灌注量，糖浓度在0.3-0.5mg/ml即可；
2、控制pH

bojitu[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个密度，你做灌流培养，细胞截留怎么解决呢？

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ATF系统可以搞定吧

yhn[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个密度，你做灌流培养，细胞截留怎么解决呢？

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我们是用沉降器截留的，灌注流速在为1个体积每天。

txwuyan[使用道具]
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发表于 2015-10-12 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

CHO表达，葡糖和乳酸测定都正常，摇瓶和罐子细胞密度都控制在15~20million，罐子DO 50%，转速维持细胞悬浮不结团。

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罐里的细胞糖耗和乳酸摇瓶没有差异，耗氧也没有问题，说明你的细胞生长和代谢是正常的。如果每天糖耗变少可能是细胞状态很差（在罐里需要优化发酵条件）；如果糖耗正常乳酸异常说明细胞代谢问题（可能是pH或溶氧问题）。
如果各项检测参数都和摇瓶一致，那就要细胞株本身稳定性了（DHFR筛选系统稳定性很不好）。我们之前遇到过一个项目开始复苏时的表达量和两周以后的表达量差异比较大后来放弃了。