【求助】关于唾液酸酶酶切

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标题:【求助】关于唾液酸酶酶切

abc816[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如题，小弟最近在做的一个单抗，想看看唾液酸含量对IEC酸性峰的影响，所以进行了唾液酸酶酶切处理。但问题来了，原来我们做的项目都是CHO细胞表达的，表达出来的唾液酸类型都是NANA，但是这次的产品既有NANA又有NGNA，请问这两种唾液酸需要用不同的酶来酶切吗？谢谢

ero11[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看说明书咯，里面应该写的很详细吧

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该不需要吧，这两个仅仅相差一个羟基。

orangecake[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不需要的，我们试过的。

sunnyB[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不用吧，好像。酶切位点好像在第一和第二单糖间。不再唾液酸那里

gogo[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

NANA、NGNA是什么？想学习学习

abc816[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

N-羟乙酰神经氨酸N-glycolylneuraminic acid(NGNA)；N-乙酰神经氨酸 N-acetylneuraminic acid(NANA)均系唾液酸（N-酰基神经氨酸），是一种多糖，特别是其作为分泌在动物细胞表面或细胞外的糖蛋白质和糖脂质末端的糖成分而广泛地分布着。

gogo[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢！这两种唾液酸是通过什么检测手段区分的？

abc816[使用道具]
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发表于 2015-10-12 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gogo 于 2015-10-12 15:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢！这两种唾液酸是通过什么检测手段区分的？

较广泛的唾液酸（NeuAc）和神经氨酸（NeuGc）比例确定方法是如下：
1. 通过轻度酸水解放糖蛋白上的唾液酸残基。
2. 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亚甲基苯酚（DMB）荧光标记释放的唾液酸。
3. 通过高效液相色谱法（HPLC）或超高效液相色谱法（UHPLC）对DMB标记的唾液酸进行相对定量分析。