【求助】求助经验

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标题:【求助】求助经验

ha111[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养CHO细胞，打算悬浮培养，获得我们想要的抗体，由于我们现在没有玻璃培养瓶，还是塑料的，就只能是每天去吹吹，让它悬浮。可是效果不怎么好，并且细胞现在开始扎堆，又都严重点看起来都像是细胞球了，这是不是又会严重影响它表达了吧！同时，将其汇聚管中，离心之后添加少量培基吹打，有的都吹不开！请教有没有遇到这类问题的？有该如何解决？另外，有些细胞贴壁感觉偏牢固，用胰酶消化，这是否可行？消化之后用生理盐水，吹悬洗一次，重新种皿就可以了？多谢！

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个跟玻璃瓶塑料瓶没什么太大关系，
关键是要摇起来、转起来，楼主这个做了没
建议楼主看看CHO悬浮驯化方面的文章

ha111[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 summerxx 于 2015-10-13 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个跟玻璃瓶塑料瓶没什么太大关系，
关键是要摇起来、转起来，楼主这个做了没
建议楼主看看CHO悬浮驯化方面的文章

现在的关键是，我们现在还没有这样的仪器，目前主要就想先检测到有蛋白表达，给上面有个交代，才可以陆续购置相关的仪器等，我们现在吹悬也是可以的吧。

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ha111 于 2015-10-13 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

现在的关键是，我们现在还没有这样的仪器，目前主要就想先检测到有蛋白表达，给上面有个交代，才可以陆续购置相关的仪器等，我们现在吹悬也是可以的吧。 ...

只有检测到表达，不需要悬浮。你现在就靠反复吹肯定是不会悬浮起来的。

xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果测定表达量，你就是贴壁也可以取样检测的，并且测得是上清中的蛋白量。我同意楼上说的和玻璃塑料没关系，如果为了悬浮起来，这个原来要是贴壁的需要你驯化。
如果原来是悬浮的、现在贴壁了，两种可能：培养基成分变了导致容易贴壁，或者是细胞状态不对导致聚团。

ha111[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xuuuu 于 2015-10-13 16:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果测定表达量，你就是贴壁也可以取样检测的，并且测得是上清中的蛋白量。我同意楼上说的和玻璃塑料没关系，如果为了悬浮起来，这个原来要是贴壁的需要你驯化。
如果原来是悬浮的、现在贴壁了，两种可能：培养基成分变了导致容 ...

现在细胞用无血清培养，细胞根本就不长，用胎盘蓝检测，细胞也都会是活的。我们现在开始一点点降血清培养了，由于有血清，也是没有办法进行检测，血清的杂带还是很多的？所以现在只能是等血清降到一个无限低的水平才可以进行检测了？

ha111[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 summerxx 于 2015-10-13 16:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

只有检测到表达，不需要悬浮。你现在就靠反复吹肯定是不会悬浮起来的。

恩，我们尝试吹悬，的确如您所说，不仅悬浮不好，还成团？不知您有何建议？

moonlight[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先用含血清的培养基在大平皿里把细胞扩起来，长满了之后弃掉含血清培养基，用pbs清洗两边后再换成无血清培养基，把细胞养到死后纯化上清

ha111[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为了应付检测，这是可以！

woshi[使用道具]
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发表于 2015-10-13 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

买个corning的roller bottle就可以一直滚动了，可一毫升protain A纯化用血清培养的发酵液，从你说的来看你好像是用电泳的方式确定是否表达；另外，既然要做这个了，一些简单的设备还是要买的。

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