【求助】DNA残留方法学验证中线性验证的问题

生物制药 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】DNA残留方法学验证中线性验证的问题

11 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】DNA残留方法学验证中线性验证的问题

vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2015-10-13 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠，在DNA方法学验证中遇到一个问题，就是线性验证应该选择什么范围进行验证？

vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2015-10-13 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果标准采用小于100pg/反应的话，应该是验证50-200pg/反应的范围还是按照试剂盒的标准曲线0.03-3000范围进行验证？

idea2011[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77656
精华 0
积分 552
帖子 783
信誉分 100
可用分 4726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态离线

发表于 2015-10-13 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得验证50-200就可以了。但是有研发觉得验证0.03-3000更好，范围更广。另外宿主蛋白残留的标准曲线不是直线，不知道线性应该怎么做？

vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2015-10-13 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 idea2011 于 2015-10-13 16:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我觉得验证50-200就可以了。但是有研发觉得验证0.03-3000更好，范围更广。另外宿主蛋白残留的标准曲线不是直线，不知道线性应该怎么做？

宿主蛋白的线性，也是按着质量标准的50%-150%范围内进行线性验证吧。线性不是按标准曲线来的，是按着y轴是加标测定值，X轴加标理论值，做直线。

SO2[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 118006
精华 0
积分 355
帖子 369
信誉分 100
可用分 2696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态离线

发表于 2015-10-13 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在这个验证范围内，你的分析方法，在线性、准确度和灵敏度方面，应该都符合要求。

#碧海潮生#[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 75141
精华 0
积分 131
帖子 41
信誉分 100
可用分 896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2015-10-13 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那是否自建DNA残留检测方法时，没有必要将像试剂盒的标准曲线一样做到0.03pg，只要质量标准的50%-150%处在线性范围内并做好验证就可以了？

vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2015-10-13 16:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是怎么自建的？自己设计引物和探针？检测什么细胞的DNA残留？

#碧海潮生#[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 75141
精华 0
积分 131
帖子 41
信誉分 100
可用分 896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2015-10-13 16:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

CHO细胞，自己设计引物和探针，样品的DNA用life的试剂盒提取。但是方法的灵敏度要比life的试剂盒低，不知道是否符合要求。

vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2015-10-13 16:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

低一点，能达到你们的检测标准并且能达到专属性要求，应该也是可以的。想请教一下，你们在一个PCR反应中加了几个探针。如果就是一个的话应该不够的

#碧海潮生#[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 75141
精华 0
积分 131
帖子 41
信誉分 100
可用分 896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2015-10-13 16:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 vivian4123 于 2015-10-13 16:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

低一点，能达到你们的检测标准并且能达到专属性要求，应该也是可以的。想请教一下，你们在一个PCR反应中加了几个探针。如果就是一个的话应该不够的 ...

为什么加一个探针是不够的，我看到的文献专利都是这么做的

11 1/2 1 2 ››