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标题:【求助】3T3L1分化时飘了，越飘越多，分化不成功

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-14 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你这细胞看上去比较小，不够肥大，我看你第一张图片，分化也还可以，但算不上高。
年代有点久远了，我回头帮你找一个我们养过的3T3L1分化染色图片和细胞图片吧。
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雪花子[使用道具]
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发表于 2015-10-14 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这几日主要清洗器皿，订购了液体的胰酶，PBS，gibco的血清，协和还没有给消息，希望这周可以拿到细胞。
又上ATCC看了一眼图片，细胞确实较我的饱满一些，但差异也不是很大。图片贴上来大家也能看看。
目前怀疑有可能支原体污染，细胞房的同学比较多，管理上也比较松散，污染的可能性不小，现在只留了一瓶细胞，准备种玻片然后hoechst 33258染色看一下，如果怀疑就买一个检测支原体的kit PCR一下，确认是否为支原体污染。
我为什么读博士，只是因为还有一点求知欲和好奇心想知道为什么！！所以，虽然这批细胞估计是没戏了，但，死也要死个明白！！！自己给自己打气，一定要坚持到底！


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2015-10-14 16:38
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-14 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体污染最主要由细胞源污染和血清污染导致，其它试剂你严格灭菌，过滤，一般不会轻易引入支原体污染，交叉污染只要注意操作也很少见，不像酵母，容易空气传播交叉污染。除非你实验室环境附近有什么特殊的带来支原体污染的东西。
要注意细胞来源污染。血清你这次用gibco的，不会有问题了，pbs也注意灭菌好，所以试剂要单独使用，不要和其他人混用。
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发表于 2015-10-14 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我已经从协和细胞库拿回来新的细胞株，但观察觉得状态一般，协和老师说这是复苏后第一代，所以可能需要再培养观察一下。
我已经传代，冻存了一些， 现在种了小皿，过几天就可以分化，看分化的效果，然后再来告诉大家，只有能分出来，才是好细胞。给大家看看这张图，是协和细胞拿过来传代后第2天的效果，感觉细胞不够丰满，有些细胞轮廓不清，状态一般。
希望和我一样在实验中遇到困难的人坚持到底！给自己打气！


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2015-10-14 17:08
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misswu61[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做分化，分化率时高时低，完全可以体谅诱导等待中的焦虑心情，继续加油努力啊!
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

虽然做的不一样，我是个初进实验室的新手，两个月一直在做PCR一次也没有成功过，一起加油吧。
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很可能是试剂的问题，我们都是每次分化之前现配。
顺便问一下，从协和买这样一株细胞多少钱？
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雪花子[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 caihong 于 2015-10-14 17:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

很可能是试剂的问题，我们都是每次分化之前现配。
顺便问一下，从协和买这样一株细胞多少钱？

呵呵， 在我的体系里试剂应该不是问题，首先，我配的试剂曾经顺利分化达1年半之久，其次，我在今年分化出问题时所有试剂又重新配了一遍，都不成，试剂货号，配制方法全都不变。现在怀疑还是细胞出了问题。但出现问题之后，分析起来就是一个黑箱效应，只能从外面猜，看不到里面。现在仍在研究中，但结果未确定，等些时候我会再更新。
另外，协和的细胞不贵，700元一瓶。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前也做过这个细胞的分化，发现细胞开始分化后贴壁效果就比较差，会有很多细胞飘起来，严重的时候是整片细胞全部掉下来。后来每次种板前都先用明胶预包被一下，基本上在分化过程中细胞就不会飘了。
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PINK[使用道具]
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发表于 2015-10-14 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vvmmoy 于 2015-10-14 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我以前也做过这个细胞的分化，发现细胞开始分化后贴壁效果就比较差，会有很多细胞飘起来，严重的时候是整片细胞全部掉下来。后来每次种板前都先用明胶预包被一下，基本上在分化过程中细胞就不会飘了。 ...

如果你买的polysine处理过的dish，还这样飘，是细胞状态不好的原因，代数过老也会导致贴壁不牢。加明胶可以帮助解决问题，但最好还是更换细胞，不然实验结果也会有出入。
就像人们说293或者293T贴壁不牢，其实完全是误解，都是因为用的细胞代数太长了，状态不好了。
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