小中大您说的都到我心坎上了，在于历经艰难之后的那一丝曙光……
为了保证冻存细胞的质量，我一共分了5瓶细胞，然后分别冻存，然后这5瓶细胞我冻存同时各种了一个孔（6孔板），刚好一块板子。因为5瓶细胞的细胞数不尽相同，种皿的时候是约1比10稀释种的，没有计数（实在太花费时间了，这样冻存就耽搁了），所以皿里的细胞长的也有些差异，不像一起种的那么整齐，长满的时间也就不同，有的早上满了，有的中午，有的到晚上才差不多，还有的可能要等到半夜，呵呵，我不能严格按照长满后2天分化，所以取了一个大部分细胞都已经满了的过2天时候来分，呵呵，这就是我说的“我选择分化的时间”，应该是分化开始的时间，这个时间点这次并不十分严格，可能引起每个孔分化效率不一样，有的好，有的稍微差一些。
如您所说，分化开始的时间和分化液处理时间的标准方案都是经过长期实践积累出来的，最有利于细胞分化的方案，也有相当多的机制理论支持，这种方案我可不会轻易改变，这次主要是为了实际操作的便利性和可行性，人为地统一了开始分化时间，分化阶段分化液加入和撤出时间仍然严格按照标准方案执行。
比如，这两个孔的分化率就不太一样，但通过分化开始时间的调整，我想应该可以到更好的分化率。
我们有同学也采用3+3（诱导分化液3天+胰岛素3天）方案，这种方案分化率也会增高，但我感觉如果2+2（诱导分化液2天+胰岛素2天）可以，还是用2+2的好，3+3有时候培养基会变的相当黄，这两种方案都有文献使用，2+2较多用。
这两种方案我其实都用过，对细胞的影响，我没有看出来本质的不同，但肯定会有不同，只是我不知道。还请前辈指教。
