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标题:【求助】3T3L1分化时飘了,越飘越多,分化不成功

雪花子[使用道具]
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油红染色后直接观察,可见均匀的红色。


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2015-10-14 17:21
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雪花子[使用道具]
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这是显微镜下看见的,显微镜效果一般啊,照相技术也很一般,细胞太厚,所以聚焦困难,不论如何,都有不清晰的背景。
对不住,我油红染色的技术不怎么样,感觉细胞固定后有些变形,未染色前镜下看脂滴更丰富,染后的脂滴没那么充满?可能也是视野的不同,但这张图可以代表典型视野,我觉得分化到这种程度,是可以进行实验。如有不同意见,请各位前辈多多指导。
这个帖子得到很多坛友的帮助,在此我谢谢大家了。
在这里尤其感谢思路迪前辈,前辈一直对我的实验很关心,在我最消极和低沉的时候给了我很多鼓励和建议。现在想起来,没有大家的支持,我不知道能不能支撑的过来。这个过程对于我,真的非常有意义,我感觉自己真的坚强了许多。
在此,也祝愿和我一样在研究路上前行的同学,遇到困难坚持住,往前看,不放弃,一定能有解决的方法!!!


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ztonyc[使用道具]
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见过牛X的帖子,没见过这么牛X的!
最近我做转染效率很低,一般绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转,只能看到一种光,而且在蓝光激发下,黑色背景处能看到一个一个小亮点,怀疑是支原体污染,苦无证据!
本想放弃,看到楼主的贴子,忍不住顶了一下!
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moonlight[使用道具]
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我的细胞也这样,不过我是3T3-E1
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楼主还在不在?我是楼上的楼上,本来不想验证的,受了楼主的鼓励,决定做一下。
这是我用DAPI染色后的图片,不知道是否是支原体污染,求高人鉴定。
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okhaha[使用道具]
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不会贴图片,刚才试了一下,不成功,我只有上连接了,大家帮我看看哈!
cuturl('http://bbs.bbioo.com/thread-95937-1-1.html')
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首先,原则上如果确认支原体污染,就直接放弃,如果是珍贵细胞,比如自己培育的细胞株,或者无法购买的,只能用杀菌剂试试看。
其次,支原体抗生素环丙沙星在临床是有效的,但喹诺酮类抗生素对细胞生长和分化到底有什么影响,我现在也不知道,有市售的专门针对细胞培养支原体污染的抗生素,我记不得厂家了,搜搜就知道,但是价格昂贵,差不多要1000多,所以,还不如买新的3T3L1了。
为了预防支原体污染,能不能预防用药?比如用低浓度的环丙沙星,是否能找个浓度对细胞影响最小?我现在正在做这方面的尝试,但这只是个人经验,不知道可否推广,因为具体情况实在太多的不同,总之,细胞房的环境要保持,然后,操作一定要细致,有结果再来汇报。
......

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M-Plasmocin,可以去除支原体污染,一瓶一千多,但有个好处是处理过的细胞不会再次被支原体污染,如果细胞房环境较差,用的人太多可以考虑用用,毕竟不是每个做实验的人都有实验素养的,我们也基本无法过于约束别人
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雪花子[使用道具]
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不会贴图片,刚才试了一下,不成功,我只有上连接了,大家帮我看看哈!
cuturl('http://bbs.bbioo.com/thread-95937-1-1.html')
我不太确定,因为我们染色剂不同,你用的是PI染色,我用Hoechst染色,这两种染色剂原理并不完全相同,支原体hoechst染色是可以看出来的,但是PI,我没有经验。

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建议查一下染色原理,或者换用Hoechst染色再看看。
还有一个关键问题,染色看是否支原体污染,因为只能人为观察,很多主观因素存在,因此必须有阴性对照,以确定没有污染的图象,再比较之不同。
祝好运。
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我不太确定,因为我们染色剂不同,你用的是PI染色,我用Hoechst染色,这两种染色剂原理并不完全相同,支原体hoechst染色是可以看出来的,但是PI,我没有经验。
建议查一下染色原理,或者换用Hoechst染色再看看。
还有一个关键问题,染色看是否支原体污染,因为只能人为观察,很多主观因素存在,因此必须有阴性对照,以确定没有污染的图象,再比较之不同。
祝好运。
......

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说得好,我明白了。做个阴性对照。
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vera+[使用道具]
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相关疾病:
先天性卵巢发育不全综合征

我最近也在做3T3-L1细胞株的分化,也卡主了,想请教一下师姐,你真的好厉害啊,太坚强了,师姐能否私信一下你的QQ,小弟的63477245,我想Q聊方便些,我最近也很痛苦这个东东。麻烦师姐帮帮忙。。。
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