细胞世界

目前，我已经毕业，实在是被伤到了，所以以后不再作科研了，估计也不会再养3T3L1，其实，这个细胞我刚拿到手的时候觉得还挺好养的，越到后来越知道难处啊。3T3L1培养和分化可能遇到的问题我只能尽我所知的总结如下：
1，分化不全，分化中细胞飘了；
2，一个假期回来细胞就变了，做不出来了；
3，有时候能分，有时候又不能分，分化率不能总控制的很好，实验重复不好；
这样的情况太多了，我个人觉得和整个实验平台有关。我遇到一个瑞士回来的博后，我跟她谈起我做3T3L1多么艰难的时候，她完全不能理解，觉得怎么会呢？她养3T3L1还能放双休，人家说3，4天换一次液没问题啊，当时我那个憋啊，这人和人差距怎么这么大啊……
废话不多说，在国内养3T3L1我的local建议：
1，首先考虑预算，老板有时候一拍脑袋就要做，他可能并没有细致思考要花那么多大米。
你要给他成本预算，3T3L1细胞株培养分化会比其他细胞基础培养贵很多，强烈建议全部使用protocol上的进口原单产品，例如sigma进口产品。包括常规DMEM，PBS，胰酶，全部要用原配的，而且永远不要随意改配方，用上好就一直用，要不然不知道怎么了，细胞就挂了。列个单子让老板看看，我当时大致算过，常规培养1瓶75cm细胞，每3天消化一次，种板，再分化，循环作业，一个月要数千以上。当然还不包括实验测试部分，比如去做cofocal啦，流式啦，WB等等啊，所以他要没这个底气，直接别做，要不然死定了。
2，如果作，细胞株的购买，我推荐北京协和细胞库，如果能直接从ATCC来当然更好。
如果细胞养着养着不分了，建议直接去协和再买一株，应该800元左右，成本最低的就是直接买。
3，考虑环境问题，我感觉国内细胞培养分化不成的关键问题是污染问题。
包括支原体污染，隐形细菌污染，或许还有重金属污染，液氮里污染更常见。WHO KNOWS???反正一切都不干净！为什么一过暑假细胞就挂啊，夏天，从液氮复苏，培养试剂放了一个假期……我后来都不敢放假，就怕回来不分了，真的很惨啊。
怎么办呢？说实话，不知道。双抗，或者再加上环丙沙星，起码有点保险吧。培养用品多高压灭菌，多消毒，决不重复使用二次。别的，操作就不说了，你要是粗线条的，分装直接拿瓶子倒的那种，那我就建议别作，真的，别作。
这个帖子时不时有人会看，会跟帖，好多同学遇到和我一样的困难，我只能说祝你们好运。要么坚持，要么及早掉头，加油吧。
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这个细胞号称世上最难养的细胞，，，那真不是盖的。。。