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标题:【求助】6孔板每孔要接种多少细胞才会长成单层细胞？

jude[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】6孔板每孔要接种多少细胞才会长成单层细胞？

如题。
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发表于 2015-10-15 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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发表于 2015-10-15 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先要看细胞的大小。
一般要几十万，10的5次方以上。
当你铺上去，需要留一定的空间给细胞生长。细胞需要两至三天的生长时间才能长满传代。
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发表于 2015-10-15 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般需要2－4＊１０000个细胞的说
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是原代培养,应在10的6次方以上,若是传代,10的5次方到6次方
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jude[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就是说是十万个细胞？这么多阿？我是用来提RNA的，Hep3B。这样好像也太多了吧。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要記得細胞接種密度太低會長得很差啊~
這細胞你自己應該養過吧?
你應當把平常慣用的培養密度照按照面積的比例去計算,
就會知道六孔板該養多少細胞了.
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发表于 2015-10-15 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是提取RNA用的话，我们的经验是：
细胞数在1-5×10 7是最佳的。通常不要小于10的6次方，否则RNA的量会偏低，不利于下面试验步骤的进行。
而在实际操作中，往往是细胞在培养板中长到90％以上后 就基本就可以达到这个要求了。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

六孔板每孔长满后 细胞大约为2×106左右
你可以根据细胞的生长速度 细胞大小
干预因素对细胞生长的影响 以及加干预因素后所需的干预时间
来决定铺板的密度 六孔板对于RNA抽提来说 细胞量是足够的
我们实验室一直如此
如 司马 战友所讲 如用invitrogen的trizol方法细胞量 在100－10000时也是可用的
但是对小量RNA抽提 5×106比较理想 可参阅说明书
当然 不怕浪费也可以用100mm的dish 在处理因素比较廉价时可以考虑
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PINK[使用道具]
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发表于 2015-10-15 11:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这与接种所用的血清的含量也有关系的。如果你用2-5%的维持培养基的话，应该接种稍微多点，因为这时候细胞不在增殖或增殖很少。如果你还用正常的10%的培养基，则细胞数应该少点。
还与你铺板后的培养时间有关系。继续培养12小时还是24小时？
我们的做法：
10%FCS，1乘10的6次方，晚上接种，过夜（约12h）。
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