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标题:【讨论帖】讨论

NBA[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 49888 于 2015-10-15 15:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

一直都是用稀盐酸调的 为什么会有这个问题啊

请问是多大浓度的稀盐酸,是过滤之前用,还是过滤之后用!谢谢
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seagate[使用道具]
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我觉得是可以的,不过要先把HCL稀释成一个当量的浓度,然后滴入培养基调PH值,我自己试过,是可行的,而且我是用来培养神经元细胞,养活了。要不你尝试一下?
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补充一下,用稀释后的HCL调了PH值后再过滤就可以了
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第一阶段总结,欢迎大家继续讨论
已有结论:目前用于培养基Ph值调节的主要有1N NaOH、1N HCl、NaHCO3和CO2,其中还有少部分战友在配培养基的时候加入了hepes,并且这些调节都是在培养基过滤之前调节的,
依然存在的问题:上述的调节方法都是在培养基过滤之前进行的,对于培养基过滤以后使用期间的ph调节很少有人讨论,只有111ading和唐朝风韵两位战友提到:配1N HCL灭菌后进行调整,但是这两位战友并没有讨论是如何灭菌1N HCL的,和灭菌后如何保存及保存时限。
下一步期待:期待大家讨论一下培养基过滤以后的ph调节所用的溶液的配制方法,除菌方法,除菌以后如何保存,保存条件,保存的期限。
比如:除菌方法的讨论,首先是否需要除菌,然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌,为什么,比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌,原因是强酸强碱里面细菌无法生长,但是也有人比如111ading战友说配1N HCL灭菌后进行调整,需要灭菌,那么到底需要不需要呢,请大家讨论?
再比如:ph调节液该如何保存,最多可以保存多少天,在什么条件下保存,是4度冰箱还是室温,请大家讨论?
请大家继续讨论!!
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我们配KNOCK OUT DMEM培养基也一直用盐酸+氢氧化钠调pH的,不过调之前加3.7g碳酸氢钠/L,按照说明书做的,一直以来细胞也很正常。我们的水是用hyclone的细胞培养级水,一般配完都偏碱,有时候我们为了省时间直接用浓盐酸调了,也还好,呵呵。
对了,想问各位战友一个问题,调好pH的培养基要过0.22微米的膜除菌,然后我们最后的完全培养基中需要加牛血清,是先把血清加进去再过滤,还是过滤完再加呢?还有个问题,如果加了血清再过滤,貌似非常难,有没有什么好的方法?
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原帖由 one 于 2015-10-15 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们配KNOCK OUT DMEM培养基也一直用盐酸+氢氧化钠调pH的,不过调之前加3.7g碳酸氢钠/L,按照说明书做的,一直以来细胞也很正常。我们的水是用hyclone的细胞培养级水,一般配完都偏碱,有时候我们为了省时间直接用浓盐酸调了,也 ...

过滤后的培养基是无菌的;
血清是无菌的;
难道混合到一起就有菌了???!!!
所以,完全没有必要多此一举,费时费力不说,还容易出错,不过心理上好受一点。
此外,配好培养基以后的第一件事不是养细胞,而是检菌!!
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原帖由 NBA 于 2015-10-15 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

过滤后的培养基是无菌的;
血清是无菌的;
难道混合到一起就有菌了???!!!
所以,完全没有必要多此一举,费时费力不说,还容易出错,不过心理上好受一点。
此外,配好培养基以后的第一件事不是养细胞,而是检菌!! ...

谢谢版主提醒,其实我们每次过滤完都会检菌的。至于加血清再过滤,不是我本人,只是看到实验室有人那样做,非常的吃力,才顺便在这里问一下的。
我们配好的培养基一般都分装保存于4度冰箱,限两周内用完,使用前先预热。
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1N NaOH的配制方法(500ml)
20gNaOH溶于蒸馏水中,加水稀释至500ml
1N HCL的配制方法(500ml)
41.6ml浓盐酸,加水稀释至500ml
分装后,室温保存。
一直用到完为止,也不知道能保存多长时间,
也没有注意能保存多久,反正是一直在用的 ,
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原帖由 芙蓉宫主 于 2015-10-15 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1N NaOH的配制方法(500ml)
20gNaOH溶于蒸馏水中,加水稀释至500ml
1N HCL的配制方法(500ml)
41.6ml浓盐酸,加水稀释至500ml
分装后,室温保存。
一直用到完为止,也不知道能保存多长时间,
也没有注意能保存多久,反正是一直在用的  ...

请问是在培养基过滤之前用来调ph,还是培养基过滤之后用来调ph呢????
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说的很有道理,NaHCO3可以和CO2够成一个缓冲体系,这样对维持PH值可能会更好!
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