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标题:【讨论帖】讨论

txwuyan[使用道具]
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61
 

我想从以下几个方面回答这个问题:
1、配制培养基PH值有一个原则,就是宁愿酸不要碱。
2、我配制DMEM培养基是这样调PH值的
用900ml左右的去离子水溶解干粉DMEM培养基,
加入 3.7g NaHCO3 搅拌溶解一至两个小时
这时候的培养基溶液PH值大致在8.6左右
3、直接加入浓盐酸1ml左右,这时候的PH值大至在6.6-6.8左右
4、定容至1000ml
5、过滤培养基,这时候的PH质在7.2左右,正好
不知大家注意到没有,过滤培养基会使得其PH值上调,
因此我在配培养基的时候故意在过滤之前将培养基的PH值配的偏酸一点,这样过滤后的PH值就
正好是所需要的范围。
大家看我只用了NaHCO3,和HCL ,没有用到NaOH.
此方法比较简单,百试不爽,你也可以试试看
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txwuyan[使用道具]
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62
 

我从不在过滤后调PH值,请大家注意,虽然有很多方法在过滤后调PH值,但是我不建议采用
毕竟过滤后我的培养基就马上要分装的,保持的是无菌状态,一个过滤好的无菌状态的培养基
为什么还要被折腾来再去配PH值呢,所以原则上过滤后不应该去调PH值。一切都要在过滤前解
决。
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txwuyan[使用道具]
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63
 

补充一点,我的DMEM培养基是放在负20度保存的,效果不错,两个月内解冻没有问题,请问大
如过两个月还用不完1L培养基,那你的细胞怎么在养就不好说了,呵呵
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okhaha[使用道具]
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我们一直用5N的HCL450ul调PH值即可,也可用CO2来调,但必须的有经验,而且使用时很容易变碱
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Darcy[使用道具]
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65
 
因为外出好久没上园子了,看到楼主的总结,写的很好,对我们也是受益颇多。
我们实验室的看法是:HCL肯定是不能高温灭菌,因为超过了HCL沸点后就会挥发,如果高温灭菌后,就成为水了。我们实验室一般为两种,做的稍微粗一点的就直接拿纯盐酸对灭菌水配,如果细致一点的可以配完用可回收的小滤器滤一下。一般最好保存在4度,可以稍微长一点,我们一般是配了几个人一起用,一两个月内没有问题。希望大家一起探讨。
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chenshuanhe[使用道具]
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我的培养基配置后给细胞使用后,第二天就边黄了,我不知道1640里面有没有酚红指示剂
别人都不是用1640养的,都是用DMEM。他们的比我红很多
我调了PH值,7左右,但是依然第二天培养液就变黄了。
配方:1640:胎牛血清 9:1
外加三种因子和双抗:胰岛素,胰岛素样生长因子,表皮生长因子,还有青链霉素。
1640过滤后再加入三种因子和双抗。
配置完毕后红色就比较淡了。测PH值,在7附近,偏碱一点。
但是细胞培养时,换液,过夜后培养瓶中液体完全变黄,完全变黄。彻底的黄色,很多师兄师姐说太酸了,PH值没有调好,我就彻底晕菜了?
到底怎么搞啊,细胞倒是能活,我每天换液。
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我的培养基配置后给细胞使用后,第二天就边黄了,我不知道1640里面有没有酚红指示剂
别人都不是用1640养的,都是用DMEM。他们的比我红很多
我调了PH值,7左右,但是依然第二天培养液就变黄了。
配方:1640:胎牛血清 9:1
外加三种因子和双抗:胰岛素,胰岛素样生长因子,表皮生长因子,还有青链霉素。
1640过滤后再加入三种因子和双抗。
配置完毕后红色就比较淡了。测PH值,在7附近,偏碱一点。
但是细胞培养时,换液,过夜后培养瓶中液体完全变黄,完全变黄。彻底的黄色,很多师兄师姐说太酸了,PH值没有调好,我就彻底晕菜了?
到底怎么搞啊,细胞倒是能活,我每天换液。
......

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细胞的状态如何,只要状态好,就不用管它吧。
此外,培养基变黄,是否浑浊,如果浑浊,怀疑污染。如果不浑浊,则1细胞量的多少,量太大代谢多,肯定要变黄;2ph值的问题,偏酸了。
关于ph值,你配制以后测的值是用试纸测的,还是ph计啊,建议ph计。
还有一点经验:变黄,如果是触目惊心的黄,那么一般都浑浊了,就是污染了
good luck!多思考
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1.请问你们的HCL和NaHCO3是如何进行无菌处理的。谢谢
2.根据我看的资料,好像hepes的缓冲能力很强,但是没有见过配好后的培养基用hepes调ph值的。呵呵,我有很多的hepes,不知道如何使用,除了配培养基的时候用那么一点点,甚至现在培养基里已经添加有了hepes,真的不知道该如何充分利用hepes。

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灭菌我们直接高压,但盐酸浓度不能过高,会挥发。我们养的细胞是直接用HCl调pH的
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如影随形[使用道具]
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细胞的状态如何,只要状态好,就不用管它吧。
此外,培养基变黄,是否浑浊,如果浑浊,怀疑污染。如果不浑浊,则1细胞量的多少,量太大代谢多,肯定要变黄;2ph值的问题,偏酸了。
关于ph值,你配制以后测的值是用试纸测的,还是ph计啊,建议ph计。
还有一点经验:变黄,如果是触目惊心的黄,那么一般都浑浊了,就是污染了
good luck!多思考
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是触目惊心的黄,但是,镜下细胞活着,贴壁良好,生长良好,培养瓶对光,挺清亮,有师兄说支原体感染看不出,请教下,怎么解决。我没有PH计,只有试纸
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如影随形[使用道具]
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70
 

镜下也没发现什么别的生物,就是细胞,还有些死亡的上浮的,下面贴壁百分之70%要传代了。
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