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标题:请各位大侠看看我提的RNA，能做RT吗？

seven7[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位有人认为RNA 18S和28S为1:2才不降解，可能是从书上看的吧，实际操很难达到，并且RNA有物种和组织特异性，有的组织和昆虫的18S和28S并非如此，可能还不是18S和28S。
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pou[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果我是你我就不作了。大量DNA污染，有破坏和降解。除非是像看家基因一样好扩的，否则我几乎可以联想您做不出来的情况了。

alphacn

各位有人认为RNA 18S和28S为1:2才不降解，可能是从书上看的吧，实际操很难达到，并且RNA有物种和组织特异性，有的组织和昆虫的18S和28S并非如此，可能还不是18S和28S。

物种差异性我不敢否定，我没有做过，但是提到1:2实在也不是什么难事。 如果你比较愿意出钱用Qiagen就行了。呵呵

此外比例不对不一定是RNAase作用的结果，可能是机械破坏而导致。  
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米米[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教rna电泳上样多少微升
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发表于 2011-9-20 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
但你1、3孔好像有大分子物，象DNA

我看象是蛋白多的事
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柠檬籽[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为你没有必要跑RNA的电泳 你可以用分光光度计检测RNA的含量和纯度 再来决定是否能作cDNA及PCR。电泳容易降解RNA。

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不好意思,我准备做RT-PCR,但是懂得很少,在这里我想问一个很傻的问题:你说电泳容易降解RNA,我不明白跑电泳的样品还能再收回吗?
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@木木@[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也很想知道，跑RNA电泳时，每孔的上样量多少ug合适？

我很长一段时间提取都在做提RNA，RT，可是从来每跑过电泳，因为实验室准备专门跑RNA电泳的东西很麻烦，所以一直每做，很想做！现在在这里看到可以用普通的琼脂糖电泳，很想试试！

有做过的请告诉我，上样量要多少？
是不是也需要和跑DNA一样的Loading Buffer？

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蓝蜗牛[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室一般就用0.7~0.8%琼脂糖电泳，140V，6微升样加2微升左右溴酚兰，结果还不错。
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长发piaopiao[使用道具]
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发表于 2011-9-20 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，我也要准备做RT-PCR，但是什么也不懂。问一个很菜的问题:yingchunhua 说“电泳图谱28S和18S带清楚,比值为2:1”，请问这个比值是指的什么比?
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panda王[使用道具]
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发表于 2011-9-20 14:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2:1 means the ratio of the brightness of the two bands (the two strongest ones) each lane.
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