样品前处理

我之前用过C18，C8 流动相是 A：水 0.1%三氟乙酸 B：乙腈或甲醇 0.085%三氟乙酸
上样是20ul，
今天发现 我的样品在B液中析出大量沉淀  这样会不会对我的柱子有影响啊，因为我发现上样次数多了，检测出的峰偏低 偏少了，甚至没有什么峰了。
我的样品前处理是：将1g样品 溶于10ml PH7.0的50mMPBS中 超速离心取上清。  
我想知道，如果我的样品在有机相中沉淀，是不是前处理的问题，如有是的话应该怎么办呢；还是需要调节有机相啊？
图片中分别是 水；乙腈；甲醇；乙醇；异丙醇；(纯的)  100-200ul样品 +1mL溶剂 离心后的效果

TFA、甲醇、乙腈随便一个都能使蛋白沉淀。我建议你查查文献。

一般来说，甲醇和乙腈有沉淀蛋白的作用，蛋白析出当然会对柱子不好，会堵，而且不好修复。建议改进样品处理方法，可以直接用甲醇沉淀除尽蛋白再离心进样

我们以前测的药物，所以要先沉淀蛋白，但你测的蛋白，如果用甲醇、乙腈沉淀了还怎么测？

6mg/mL....................浓度太高了吧,我这边做1mg/mL,都还要稀释才行!

那还有蛋白样品吗  我是测蛋白的

纯的有机相出现沉淀应该算是正常现象吧，而且在洗脱浓度是也不是纯有机相相呀，你又不是用纯有机相洗脱，至于为什么你的峰会越来越矮，不好说，有没有可能存在降解。。。。。还有你的柱压升高了么，样品在色谱柱析出，柱压应该会有反应才是。。。

刚才查了查之前做的图，发现柱压没有怎么升高，我今天又做了几个实验 30-100%的乙腈都能使我的样品有沉淀，而且不可再用水溶解，甲醇的也有沉淀，用水能溶解。

我也觉得我的样品蛋白量（~6mg/ml），测出来的峰高有点低。

蛋白在有机相中是会沉淀，不行，你就换方法咯。。