引物间形成二聚体怎么办？ - 经验共享

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 引物间形成二聚体怎么办？

40 2/4 ‹‹1 2 3 4 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:引物间形成二聚体怎么办？

嘉年华[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 70441
精华 0
积分 222
帖子 184
信誉分 100
可用分 1651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态离线

发表于 2011-9-20 16:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我一直在用hotstar，感觉不错。

幸福无罪[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 71237
精华 0
积分 114
帖子 27
信誉分 100
可用分 816
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态离线

发表于 2011-9-20 16:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

整个操作应在冰上进行

韩梅梅[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 72223
精华 1
积分 353
帖子 382
信誉分 102
可用分 2701
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-6
状态离线

发表于 2011-9-20 16:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

适当提高退火温度并调整体系中的Mg2+浓度，结合热启动，通常可以有效减少引物二聚体的量。当然，你同时也可以减少引物的量，也会有一定的帮助。

阿福[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 69991
精华 0
积分 269
帖子 277
信誉分 100
可用分 2146
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-3
状态离线

发表于 2011-9-20 16:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有一种特殊的引物方案可以最大限度地减少引物二聚体。
此方法是在设计引物时，在上下游引物的5'端加上序列一样的寡核苷酸尾巴，使得PCR进行到第三个循环时引物二聚体产物会自身退火形成发卡结构而阻碍继续扩增。具体的文献不在手边，有空再替您找找^_^

============================

这不是跟抑制性PCR一个道理吗？

松松[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 72884
精华 0
积分 102
帖子 3
信誉分 100
可用分 691
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态离线

发表于 2011-9-20 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在做的时侯也遇到同样的问题,最后我提高退火温度,同时减少引物的用量就可以将条带扩增出来了,但是要注意扩增结果,我阔出的结果不是很亮,最后优化Mg2+,酶,多家一些模板就可以了

麻瓜[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 70075
精华 0
积分 205
帖子 149
信誉分 100
可用分 1516
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-4
状态离线

发表于 2011-9-20 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我一直在用hotstar，感觉不错。

=================================

你能具体讲解一下什么是热启动，如何操作吗？

夕阳[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 70444
精华 0
积分 175
帖子 90
信誉分 100
可用分 1196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态离线