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标题:引物间形成二聚体怎么办？

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发表于 2011-9-20 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用QIAGEN的hotstar 没有这么麻烦，冰上将样本和酶混合后，直接上PCR仪，循环前95度15分激活酶。不用先加热样本，再加酶。

－－－－－－－

问一下：如何在冰上混呢？

==================================================

将PCR管插在冰上。最好将冰捣碎，这样比较容易而且也比较固定。  
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发表于 2011-9-20 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问问：我们实验室习惯是最后离心一下，把PCR管壁的组分都甩在一起混匀。

如果在冰上，怎么混呢？

具体这步，您是如何操作的？  
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开心蔬菜帮[使用道具]
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发表于 2011-9-20 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个问题：引物二聚体会是很大的片断吗？
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loli[使用道具]
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发表于 2011-9-20 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个问题：引物二聚体会是很大的片断吗？

===============================================================================================================

因为我们的引物一般是在４０个以下，很少在４０以上，我用过一个４５ＢＰ的一个４６ＢＰ的引物．ＰＣＲ　如果发现引物二聚体，一般都是跑到最前头的那个弥散的条带，大约在１００－２００ＢＰ的区间里吧！
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发表于 2011-9-20 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看您的引物二聚物的量。很少量的是可以测出来的，但是结果不太好,；二聚物多了，只能测出来引物！
===================================

测序前的纯化没有用么?

==================

测序前的纯化当然有用。
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发表于 2011-9-20 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢 我想问问那位有OLIGO 6 的注册号，我想看看我设计的引物是否会形成二聚体 或者 发夹结构，是不是用OLIGO 6 来分析？
怎么分析？ 现在试验停住了，以前没有设计过。
向各位求助！！
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发表于 2011-9-20 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用GENETOOL工具，可以结合原序列的情况和引物的情况，给予预测  
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发表于 2011-9-20 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再问：因为没有操作过热启动

1）是不是用的酶是特殊的，一般的Taq酶不可以，而要用HOTSTAR？
2）前面一个朋友提到的booster PCR是什么？请指点

多谢拉  
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发表于 2011-9-20 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再问：因为没有操作过热启动

1）是不是用的酶是特殊的，一般的Taq酶不可以，而要用HOTSTAR？
2）前面一个朋友提到的booster PCR是什么？请指点

多谢拉

==========================================================

热启动法,一般的酶也可以.只是一种增加特异性的方法,对酶没什么特殊的要求.
booster PCR,未见中文解释.!
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@木木@[使用道具]
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发表于 2011-9-20 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也碰到过，我是把退火温度降低，同时降低引物/模板比，这样做出来的
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