【求助】求助 - 经验共享

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求助

71 7/8 ‹‹1 2 3 4 5 6 7 8 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求助

ukonptp[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 103464
精华 5
积分 796
帖子 992
信誉分 110
可用分 5846
专家分 50
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态离线

发表于 2015-10-20 12:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 eor 于 2015-10-20 12:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
首先我提取从来没有用过抗生素，这个我觉得完全没有必要，完全的无菌操作是不会污染的，假如污染了，你给了双抗也没有预防的作用，
至于消化程度，不能给你简单的说时间，你胶原酶里面加不加DNAase等都不一样，环境温度不同，消化不足 ...

您的消化是没有问题的, 是否消化过头不好说.
不能排除后面的操作中存在, 离心过度,或操作手法过重等导致细胞受损.
同一个实验室的两个人, 用一模一样的实验方法, 出来的细胞数和活力也有可能完全不一样.
所以光看您描述的一两个地方, 无法给出很好的建议.
再尝试降低消化力度的同时, 再重新注意所有的细节. 多练习几次吧.
good luck
顺便说一句, 我提星状细胞, 从来没有用过肝素, 没有觉得影响原代. 个人经验, 仅供参考

xuuuu[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 118128
精华 1
积分 444
帖子 503
信誉分 102
可用分 3386
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态离线

发表于 2015-10-20 12:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

肝素要2000单位这么多啊。上次试了200单位腹腔注射，开腹后分离门静脉时碰到其它组织都很容易出血，灌注时感觉肝脏也很快变黄，没有凝血的感觉，所以要打2000的话会不会更容易出血啊？还有percoll的问题，我做不是每次都有分层，有过上面很厚细胞碎片层但没有肝窦内皮细胞层的情况，但是就是说加大离心力甩下来的沉淀里又确实有肝窦内皮细胞，所以这个percoll是不是也有些问题啊？方便去看下您的实验吗？

==============================================================================================

可是我是在武汉啊，而且有一年多没有做，说错了，肝素配的是2000u/ml，腹腔注射0.1-0.2Ml,也就是你说的200u左右

eor[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 117906
精华 0
积分 392
帖子 484
信誉分 100
可用分 3226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态离线

发表于 2015-10-20 12:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xuuuu 于 2015-10-20 12:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
肝素要2000单位这么多啊。上次试了200单位腹腔注射，开腹后分离门静脉时碰到其它组织都很容易出血，灌注时感觉肝脏也很快变黄，没有凝血的感觉，所以要打2000的话会不会更容易出血啊？还有percoll的问题，我做不是每次都有分层，有 ...

那请问您做percoll的效果怎么样啊？有什么要特别注意的、会影响分层效果的事项吗？是什么牌子的？原装的还是分装的？还有您有肝脏消化时的照片吗？能发给我我看看吗？多谢了！！！

gogo[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态离线

发表于 2015-10-20 12:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

sigma旗下的，名称我忘记了，当时我们是几个人合买的1L的原装的，然后互相分的。不过后来帮别人做用碧云天的也没有任何问题。percoll要原液高压现配现用，剧烈震荡混匀，有人在摇床上摇半小时，其实没必要，加完一定要看到折光线才对，一般我用滴管，你用注射器冲力太大了。肝脏照片稍后回去发给您

eor[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 117906
精华 0
积分 392
帖子 484
信誉分 100
可用分 3226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态离线

发表于 2015-10-20 12:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gogo 于 2015-10-20 12:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

sigma旗下的，名称我忘记了，当时我们是几个人合买的1L的原装的，然后互相分的。不过后来帮别人做用碧云天的也没有任何问题。percoll要原液高压现配现用，剧烈震荡混匀，有人在摇床上摇半小时，其实没必要，加完一定要看到折光线 ...

真是万分感谢！！！我还有几个问题：高压是必须的吗？我有瓶percoll放了一段时间后瓶底有盐粒样的东西，这种现象正常吗？这样的还能用吗？我用注射器是把针尖斜面贴着管壁让液体自然留下，所以冲击力应该不大吧。我有次加percoll看到25%像糖水化开的样子流到50%的层面上，因为流动起来像糖水化开的样子所以可以很清晰的看到25%停在50%上面，没有混层，但加完后静止就看不到两个浓度间的界限了，之后加了细胞悬液再离心也没有分出层。这是什么原因啊？percoll有什么方法可以鉴定质量问题吗？在别处看到有什么磁珠，是标准的漂浮密度，加到percoll上离心它停在哪层就知道分层效果了，那种磁珠哪有卖的啊？还有别的鉴定方法吗？再次感谢了！！！

whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态离线

发表于 2015-10-20 12:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

沉淀不用管，用上清液就行了，高压是为了防止污染，如果你买回来没有污染过percoll就不用高压，鉴定我还真没有关注过，你买国产的，100ml大约300也够用很久了，觉得有问题就买新的

ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2015-10-20 12:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问，ＨＳＣｓ的自发荧光，在普通的荧光显微镜下可以看到吗？

woshi[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 117885
精华 0
积分 467
帖子 674
信誉分 100
可用分 4121
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态离线