食品分析者

蛋白膜的性能与其中的巯基和二硫键含量息息相关，本人也看了很多测定二硫键的方法，但在方法描述上不一，版本众多，不知有哪位高人可否贡献一下方法，小妹感激不尽！！！

取磷酸化反应混合液2ml，加入10ml pH=8.0的Tris盐酸缓冲液和0.05ml Ellman’s试剂（5，5-二硫双（2-硝基苯甲酸）），迅速混合，室温下显色20min后，测定其在412nm处的吸光度。实验中以不加样品、而加Ellman试剂为空白，以不加Ellman试剂、而加样品的溶液测定其浊度。样品中浸提出的蛋白质用福林酚法比色测定。则样品中SH含量的计算公式如下：
SH（μmol/g）=（73.53×A412×D）/C
式中，A412—有DTNB存在时样品吸光度-无DTNB存在时样品吸光度；D—稀释倍数，对于SH，D=3.02×5=15.1；对于二硫键，D=（3.05/0.2）×5=；C—样品中蛋白质含量，g。

吸取上述蛋白质溶液4mL，加入0.1ml β-ME，混合后，室温下静置1h，然后加入5ml 25%的三氯乙酸溶液，室温混合静置1h。4500r/min离心30min，沉淀用5ml25%的三氯乙酸溶液再冲洗一次，再离心，取沉淀。然后用5mlTris缓冲液溶解沉淀，吸取1ml，加入4mlTris缓冲液和0.1ml Ellman’s试剂，迅速混合，室温下显色20min后，测定其在412nm处的吸光度。则样品中总半胱氨酸含量的计算公式如下：
总半胱氨酸 (μmol/g)＝（73.53×A412×D）/C            
式中，D—稀释倍数，公式②式中为6；C—样品中蛋白质含量，g。