食品分析者

各位高人，小女子跪求测定二硫键和疏基所用到的试剂和方法，适用于水产品（鱿鱼片）的测定方法。越详细越好。感激不尽！
    ps：之前查到测定奶制品、豆制品中用Ellman试剂比色法测定二硫键和疏基的方法，原料不同，方法跟试剂都不统一，所以没搞清楚。

我也是在测水产品中的二硫键和总巯基。可是测出来的结果令我很不满意。氧化后的巯基居然比二硫键多多了。不知道是方法错误还是怎么回事，有什么情况可以和我发邮件

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法

请问稀释倍数是怎么计算出来的？

想问一下，这个方法是自己做实验改进的吗，还是有参考文献的，如果有参考文献的话，能告诉我吗，谢谢