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标题:【求助】测量蛋白质浓度的方法

n111[使用道具]
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发表于 2015-10-23 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】测量蛋白质浓度的方法

最近投了一篇稿子，审稿人置疑了我测量蛋白质浓度的方法。
我实验中用的是牛血清蛋白BSA，用磷酸盐配成的pH7.0缓冲溶液，用紫外吸光280nm测标准曲线，然后去测未知样浓度。
审稿人置疑这种方法和Bradford法或Lowry法，哪个更好？还指出我没有提供有根据的文献，说这种根据氨基酸测量蛋白浓度的方法不可靠。
本人化工的，对蛋白质这块了解不多，BSA只是作为一种模拟物系才用到的，希望高人指点！谢谢！
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huali[使用道具]
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发表于 2015-10-23 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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这种直接测280nm吸光值的方法当然不如其他化学反应显色法，灵敏度一般低1-2个数量级。另外非常易受其他杂质的干扰
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妮子@[使用道具]
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发表于 2015-10-23 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我用的体系里面只有BSA和磷酸缓冲液两种组分，且磷酸盐组分在各个样品中浓度保持一致，这样相当于只有BSA单一组分，其他组分对测量的影响就几乎可以忽略了吧
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p1900[使用道具]
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发表于 2015-10-23 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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你的目标蛋白也是BSA么？如果不是，不能用280nm来测量，每种蛋白的extinction coefficient不一样的
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 小中大

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我只用到1种蛋白，就是BSA，没有别的蛋白了，这样能测吗？
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发表于 2015-10-23 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我用的体系里面只有BSA和磷酸缓冲液两种组分，且磷酸盐组分在各个样品中浓度保持一致，这样相当于只有BSA单一组分，其他组分对测量的影响就几乎可以忽略了吧
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发表于 2015-10-23 13:02 资料  个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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你用的这种方法太粗犷了，准确度比Bradford法低很多。其实如果有条件的话，买个蛋白质定量kit，一切都搞定了......
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dadaai[使用道具]
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发表于 2015-10-23 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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能测，不过看你的标准曲线了
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xgy412[使用道具]
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发表于 2015-10-23 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我们实验室一般Bradford法测
买个5*的公司试剂，到时候直接加水加蛋白溶液五分钟搞定
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efp[使用道具]
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发表于 2015-10-23 13:03 资料  个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

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能详细的解释一下么？
灵敏度为什么低呢？
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