PCR仪

不知道你们的定量范围是多少，反正我用pico Green和fluoromark( Bio rad)可以达到100ng/ml。 就是0.1ng/ul。 分光光度计可以吗？按照pico green的说明书，最高可以达到25pg/ml！





请问什么是pico Green和fluoromark( Bio rad)?

我有事请教:
1:你说为什么紫外分光光度定量DNA做标准曲线不适合定量PCR?
2:我们要得出样本中目的基因的拷贝数,只要根据标准曲线,定量PCR后对照就可以了啊!
3:定量PCR是不是也有绝对和相对之分,我们实验室的很多师兄师姐做定量
PCR时都用管家基因做标准曲线,虽然他们的目标基因是另外的 基因,可以吗?

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关于我说得紫外分光光度定量DNA做标准曲线不适合定量PCR，表述不太准确。其实我是想跟你说你如果用样本做标准品，是可以用分光光度仪定DNA的量，问题是怎样确定样本中目的基因的拷贝数。因为仅用样本而不用标准品无法得到准确的拷贝数。
绝对定量是以质粒DNA或纯化的DNA产物做标准品，由于可以准确的得到标准品中的拷贝数，根据得到标准曲线可以计算待测样本基因的拷贝数。相对定量很多人是用样本做标准曲线，因为很难确定样本中目的基因的精确拷贝数，所以得出来的结果是一种相对于该样本的结果。
对于师兄师姐的做法，我不敢苟同。不同的基因都需要做自己的标准曲线。即便是两个基因反应条件一样，两者的扩增效率会不一样，用这个基因的曲线计算另外的基因，一点意义都没有。

谢谢你的指导,我的师兄师姐管用管家基因做标准曲线的方法叫相对定量,把用此目的基因样本画的标准曲线叫绝对定量,看来和你的说法有点不一样,看来他们太粗了;还有我的定量PCR如果只是想在我们实验室内将正常人与病人相比,不一定要得出一个标准的限值,用此目的基因样本画标准曲线应该就够了吧.师兄师姐说用管家基因做标准曲线只要同管比较,同锅比较就可以了,是吗?用质粒DNA或纯化的DNA产物做标准品好象成本高很多吧.

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如果只在实验室内比较，相对定量肯定没有问题。师兄师姐的做法，是粗了点，不过
符合国情嘛！其实定量PCR想要做好是很难很难的，要求也是非常非常高的。
祝你成功！

知道你们的定量范围是多少，反正我用pico Green和fluoromark( Bio rad)可以达到100ng/ml。 就是0.1ng/ul。 分光光度计可以吗？按照pico green的说明书，最高可以达到25pg/ml！！！！！！

请问什么是pico Green和fluoromark( Bio rad)?

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Pico green 是专门用来测定DNA的试剂.